免疫組織化學(Immunohisochemistry)檢測技術曾被公認為病理學發展史上的第二個里程碑,此項技術發展到現在,較好充實了病理學的內容,使病理診斷結果更精確,將病理學提高到了形態和功能相結合的水平。免疫組織化學方法的敏感性和特異性直接影響診斷結果的準確性。近兩年來,在本科同志的配合下,筆者已做免疫組化420例,取得了很好的效果,并且明顯的提高了診斷結果的準確性,支持了對臨床病人的診療。現提出以下五點供同道借鑒融享生物專注于病理實驗 免疫熒光,HE染色服務實驗如果你有需要可以找融享生物。山東免疫學免疫組化檢測
免疫膠體金技術
免疫膠體金技術是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物。膠體金是指金的水溶膠,它能迅速而穩定地吸附蛋白,對蛋白的生物學活性則沒有明顯的影響。因此,用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針,就能對組織或細胞內的抗原進行定性、定位,甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒,且膠體金的電子密度高,所以免疫膠體金技術特別適合于免疫電鏡的單標記或多標記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色,因此也適合進行光鏡觀察。如應用銀加強的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。
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基本原理編輯
抗體和抗原之間的結合具有高度的特異性,免疫組織化學正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學物質提取出來,以此作為抗原或半抗原,通過免疫動物后獲得特異性的抗體,再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質。由于抗原與抗體的復合物是無色的,因此還必須借助于組織化學的方法將抗原抗體結合的部位顯示出來,以期達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性,定位或定量的研究。分類編輯
免疫組織化學技術按照標記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。
免疫熒光方法
是較好早建立的免疫組織化學技術。它利用抗原抗體特異性結合的原理,先將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原,在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體復合物中的熒光素受激發光的照射后即會發出一定波長的熒光,從而可確定組織中某種抗原的定位,進而還可進行定量分析。由于免疫熒光技術特異性強、靈敏度高、快速簡便,所以在臨床病理診斷、檢驗中應用較廣。2)免疫酶標方法
免疫酶標方法是繼免疫熒光后,于60年代發展起來的技術。基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對細胞表面和細胞內的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術是較好常用的技術。該方法與免疫熒光技術相比的主要優點是:定位準確,對比度好,染色標本可長期保存,適合于光、電鏡研究等。免疫酶標方法的發展非常迅速,已經衍生出了多種標記方法,且隨著方法的不斷改進和創新,其特異性和靈敏度都在不斷提高,使用也越來越方便。在病理診斷中廣為使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法檢測系統等。
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——90年代分子雜交技術、原位雜交技術、免疫細胞化學分類方法迅速發展。——2000年各種免疫組化技術更加成熟,使免疫組化技術成為當今生物醫學中形態、功能代謝綜合研究的一項有力工具。其應用范圍深達醫學各個學科,是目前生命科學工作者應該掌握的基本技術之一。免疫組化技術技術分類(1)根據染色方式分成:①貼片染色②漂浮染色(2)根據Ag—Ab結合方式分成:①直接法②間接法③多層法(3)按標記物的性質分成:①免疫熒光技術(免疫熒光法)②免疫酶技術(酶標抗體法、橋法、PAD法、ABC法)③免疫金屬技術(免疫鐵蛋白法、免疫金染色法、蛋白A金法)免疫組化技術標記物(1)必要性:組織細胞內Ag—Ab結合反應一般是不可見的,若在鏡下檢測,則必須具有可視性標記物。(2)常用標記物①熒光素:較常用的是異硫一氰酸熒光素(Fluoresceinisothiocyanate,FITC)——熒光顯微鏡下呈綠色熒光四乙基羅達明(rho—damineRB200)——熒光顯微鏡下發橙紅色熒光②酶:辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶。③生物素:(Biotin)④鐵蛋白金等:主要應用于免疫電鏡。其他:如同位素(因涉及污染和防護難一般不用)免疫組化技術應用凡是組織細胞內具有抗原性的物質。哪里有比較好的免疫組化服務融享生物。山東免疫學免疫組化檢測
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意義編輯
近年來,隨著免疫組織化學技術的發展和各種特異性抗體的出現,使許多疑難得到了明確診斷。在常規病理診斷中,5%-10%的病例單靠H.E.染色難以作出明確的形態學診斷。尤其是免疫組化在診斷和鑒別診斷中的實用價值受到了普遍的認可,其在低分化或未分化的鑒別診斷時,準確率可達50%-75%。免疫組織化學的臨床應用主要包括以下幾方面:
⑴惡性的診斷與鑒別診斷;
⑵確定轉移性惡性的原發部位;
⑶對某類進行進一步的病理分型;
⑷軟組織的一般需根據正確的組織學分類,因其種類多、組織形態相像,有時難以區分其組織來源,應用多種標志進行免疫組化研究對軟組織的診斷是不可缺少的;
⑸發現微小轉移灶,有助于臨床方案的確定,包括手術范圍的確定。
⑹為臨床提供方案的選擇。
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