封片

為了長(zhǎng)期保存，我們一般用中性樹膠等封片，避免產(chǎn)生氣泡，方法是直接在載玻片組織上滴一滴封片液，然后一手拿住蓋片某一拐角，而另一手拿對(duì)面的那個(gè)拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接觸到液體時(shí)為止；當(dāng)發(fā)現(xiàn)液體接觸面在不斷彌散時(shí)，則可以緩慢降低另一拐角，這樣一般不會(huì)產(chǎn)生氣泡。免疫熒光方法中的重要環(huán)節(jié)

1）冰凍切片制備

建議用新鮮組織，否則組織細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)破壞，易使抗原彌散。選用干凈鋒利的刀片、組織一定要冷凍適度等，防止裂片和脫片嚴(yán)重。

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眾所周知，冰凍切片較突出的優(yōu)點(diǎn)就是能夠較完好地保存抗原的免疫活性  ，即具有抗原敏感性高的優(yōu)點(diǎn)  。因此對(duì)冰凍切片通常不進(jìn)行抗原修復(fù) ，而在作免疫組化的研究時(shí)往往需要對(duì)組織進(jìn)行固定，固定液（如多聚甲醛、福爾馬林）使組織中的許多氨基酸殘基在分子內(nèi)或分子間形成醛鍵，使得不少抗原決定簇被封閉。同時(shí)，由于甲醛的聚合作用，使蛋白分子間相互交聯(lián)形成大分子網(wǎng)絡(luò)，也導(dǎo)致了抗原有一定的封閉作用  ，從而降低了抗原敏感性。考慮到以上原因，我們對(duì)冰凍切片進(jìn)行高溫高壓抗原修復(fù)并作對(duì)比研究。吉林特殊染色免疫組化檢測(cè)哪里有哪里有可以做免疫組化，病理切片，HE染色的公司-融享生物。

色反應(yīng)的控制  免疫酶染色應(yīng)注意控制：①成色質(zhì)濃度和溫育時(shí)間可調(diào)節(jié) ，增加成色質(zhì)的量和/或增加底物溫育時(shí)間，可增加反應(yīng)產(chǎn)物強(qiáng)度。著色太深可減少溫育反應(yīng)時(shí)間。②過氧化物酶顯色時(shí)，H2O2較大濃度將使顯色反應(yīng)過快而致背景加深；過量H2O2可能88酶的活性。

  4．復(fù)染  根據(jù)所用的染色方法和呈顯顏色等，可選用適當(dāng)?shù)膹?fù)染方法。如陽性結(jié)果呈紅或棕色，則用蘇木素將細(xì)胞核染成蘭色，以便定位檢測(cè)。也可用1%～2%甲基綠復(fù)染。

免疫組化可以輔助病理診斷、指導(dǎo)、評(píng)估預(yù)后，所以在做免疫組化過程中的質(zhì)控問題處理尤其重要。免疫組化技術(shù)是利用已知的特異性抗體或抗原特異性結(jié)合的特點(diǎn)，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯示劑通過借助顯微鏡的觀察，從而在抗原抗體結(jié)合部位確定組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的一門組化技術(shù)。在病理診斷、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究工作中免疫組化技術(shù)已成為非常重要的手段。隨著免疫組化試劑新種類不斷出現(xiàn)及方法的改進(jìn)，特別是即用型試劑盒的出現(xiàn)，使抗體的標(biāo)記更加簡(jiǎn)便、快捷，更加規(guī)范化，標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)操作是必不可少的。免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化染色技術(shù)是一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)性很強(qiáng)的技術(shù)，任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都可以直接影響免疫組化結(jié)果病理實(shí)驗(yàn)免疫組化專業(yè)設(shè)備，真實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

檢測(cè)中的顯色反應(yīng)免疫組化顯色是一種酶促反應(yīng)，它通過連結(jié)在抗原抗體復(fù)合物上的過氧化物酶或堿性磷酸酶與底物DAB發(fā)生反應(yīng)，生成有色的復(fù)合物沉淀在組織細(xì)胞中的抗原部位。由于標(biāo)本組織來源不同，細(xì)胞分化不一，抗原含量不等，顯色反應(yīng)所需時(shí)間不可能完全一致。整個(gè)免疫組化過程步驟較多，每步應(yīng)按操作要求嚴(yán)格操作，脫蠟時(shí)間一定要充分。每步PBS沖洗時(shí)間、次數(shù)一定不能省略，因PBS液內(nèi)含有鹽，可以減少背景染色。滴加試劑時(shí)要均勻、足夠，要比切片上的組織界限寬出0.05~0.35cm防止出現(xiàn)邊緣效應(yīng)。即使是同一種抗體，由于產(chǎn)品批號(hào)不同，其效價(jià)可能有差異，因此，新購(gòu)進(jìn)的抗體一定要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，找出比較好條件并進(jìn)行記錄。此外，組織浸液的溫度，切片烘烤的溫度控制，實(shí)驗(yàn)操作過程中的室內(nèi)溫度及抗體的效價(jià)等都是影響免疫組化標(biāo)記質(zhì)量的重要因素。耐心細(xì)致的工作態(tài)度，標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化的操作，是完成實(shí)驗(yàn)的基本保證。上海免疫組化找融享生物科技有限公司。內(nèi)蒙古熒光免疫組化哪家好

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石蠟切片厚4～6μm，撈片于多聚賴氨酸防脫水劑中，60℃烘烤30min～60min，再脫蠟、脫水。這個(gè)處理過程的關(guān)鍵是要保證梯度二甲苯和酒精的濃度，使組織脫蠟、脫水干凈徹底，否則，水洗后切片含有“油珠”，呈云霧狀，沖洗不干凈，致使抗體在組織上分布不均，導(dǎo)致染色效果不佳。我科的方法是:普通常規(guī)染色所用的梯度二甲苯和酒精與免疫組織化學(xué)染色所用的梯度二甲苯和酒精分開，并且定期更換液體。在二甲苯脫蠟時(shí)，二甲苯I和II脫蠟時(shí)間不少于半小時(shí)，梯度酒精各5min左右。如在室溫較低時(shí)，應(yīng)將梯度二甲苯放于恒溫箱中提前預(yù)熱，梯度酒精時(shí)間延長(zhǎng)，保證組織的充分脫蠟脫水。江西IHC免疫組化公司哪里有