好壞有著密切的聯系。由于各種抗原的生化、物理性質不同,如溫度高低、酸堿度強弱及各種化學試劑的作用均可影響抗原的免疫學活性,良好的細胞和組織學結構將有助于抗原的準確定位。因此,細胞和組織標本的采集制備在免疫組織化學技術中占有十分重要的位置。(一)細胞標本的取材目前,免疫組化技術已經應用于細胞學診斷,如鑒別低分化*與惡性淋巴瘤、黑色素瘤、低分化肉瘤等。CEA應用于胸腹水中間皮瘤與*的鑒別,熱修復法 現常用微波修復、高溫高壓修復、水浴加熱修復法。較常用的修復法是pH6.0枸櫞酸緩沖液。修復過程中的注意要點是:(1)達到規定的溫度(92℃~95℃以上);(2)維持一定的時間,微波修復、水浴加熱須控制在10~15min,高溫高壓修復須控制在2min左右;(3)避免切片干涸,如果切片干涸,抗原則可能完全丟失;(4)加熱后必須經過室溫自然冷卻20~30min,使未折疊的蛋白分子鏈恢復天然構型。免疫組化服務性價比高周期短。黑龍江特殊染色免疫組化檢測電話
免疫膠體金技術
免疫膠體金技術是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物。膠體金是指金的水溶膠,它能迅速而穩定地吸附蛋白,對蛋白的生物學活性則沒有明顯的影響。因此,用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針,就能對組織或細胞內的抗原進行定性、定位,甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒,且膠體金的電子密度高,所以免疫膠體金技術特別適合于免疫電鏡的單標記或多標記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色,因此也適合進行光鏡觀察。如應用銀加強的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。
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被檢測的物質
組織或細胞中凡是能作為抗原或半抗原,如蛋白質、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、核酸及病原體等都可用相應的特異性抗體進行檢測。
6、特點
1)特異性強
免疫學的基本原理決定抗原與抗體之間的結合具有高度特異性,因此,免疫組化從理論上講也是組織細胞中抗原的特定顯示,如角蛋白(keratin)顯示上皮成分,LCA顯示淋巴細胞成分。只有當組織細胞中存在交叉抗原時,才會出現交叉反應。
2)敏感性高
在應用免疫組化的起始階段,由于技術上的限制,只有直接法、間接法等敏感性不高的技術,那時的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍;現在由于ABC法或SP三步法的出現,使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細胞中與抗原結合,這樣高敏感性的抗體抗原反應,使免疫組化方法越來越方便地應用于常規病理診斷工作。
定位準確、形態與功能相結合
該技術通過抗原抗體反應及呈色反應,可在組織和細胞中進行抗原的準確定位,因而可同時對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察,這樣就可以進行形態與功能相結合的研究,對病理學領域開展深入研究是十分有意義的。
7、從蛋白水平檢測角度,免疫組化技術與Western blotting、ELISA的異同
1)Western blotting
蛋白質免疫印跡,也是利用抗體抗原反應原理,結合化學發光等技術來檢查組織或細胞樣品內蛋白含量的檢測方法。與免疫組化技術相比,定量可能更加準確;當然Western blotting也可定性和定位(通過提取膜蛋白或核酸白、胞漿蛋白分別檢測其中抗原含量,進而間接反映它們的定位),但敏感性遠遠低于免疫組化技術。
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染色免疫組化可以輔助病理診斷、指導、評估預后,所以在做免疫組化過程中的質控問題處理尤其重要[1]。隨著免疫組化試劑新種類不斷出現及方法的改進,特別是即用型試劑盒的出現,使抗體的標記更加簡便、快捷,更加規范化。免疫組化標準化染色技術是一項實驗性很強的技術,任何一個環節出現問題,都可以直接影響免疫組化結果,
【摘要】目的研究CEA免疫組化染色在檢測系膜微轉移及環周切緣(CRM)侵犯方面的價值。方法選取經纖維結腸鏡及病理證實為直腸*病人40例,應用大組織切片技術對術后標本處理,分別行常規染色及CEA免疫組化染色,比較分析兩種染色方法在檢測系膜微轉移及CRM侵犯方面的價值。結果CEA染色檢測**浸潤程度大于常規病理染色,差異有性(t=5.2**<0.001)
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常用染色方法
根據標記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標法,親和組織化學法,后者是以一種物質對某種組織成分具有高度親合力為基礎的檢測方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法較好常用。判定分析編輯
免疫組化染色(IHC)
免疫組化染色(IHC)
從實驗結果而言,免疫組化技術服務主要涉及抗體實驗結果的描述與分析,圖片的確定與選取,相關數據的提供,上述工作是免疫組化工作的重點內容,只有嚴格的實驗設計,標準的實驗操作,專業化的結果分析才能更好的滿足客戶的要求,這點對于形式為腹水,上清,培養液之類的抗體顯得更為重要。關于上述服務內容應該在實驗開始前由雙方明確,一般而言,客戶方實驗前應提出需要什么樣的結果與分析,例如是簡要還是詳細的描述實驗結果,需要實驗數據否,圖片的數量與規格等。如果為雙盲試驗或有第三方參與,則事先申明。
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