酶聯免疫斑點技術(Elispot)特點:酶聯免疫斑點技術Elispot(Enzyme-linkedImmunospotAssay)。結合了細胞培養技術與酶聯免疫吸附技術(ELISA),能夠在單細胞水平檢測細胞因子的分泌情況。實驗設計在96孔培養板上進行,直接以培養板的塑料板底或者PVDF膜以及硝酸纖維素膜為基質,包被上特異性的單克隆抗體,用以捕獲細胞分泌的細胞因子。(由于涉及到細胞培養的過程,對單克隆抗體的要求要遠高于ELISA中的捕獲抗體,該抗體需要無毒,親和力高等特點。)之后,在培養板的孔內加入細胞培養基(現在無血清ELISPOT技術已經成熟,培養基中可以不再含有血清)、待檢測的細胞以及抗原刺激物進行培養。液態流式技術(Luminex),流式熒光,又稱懸浮陣列、液相芯片等。mrna的生物學功能檢測服務
Q:樣本處理方案?A:血清:不含抗凝劑的**管**,室溫靜置2小時(避免震動,防止溶血),離心20min(4℃,2000g),取上清,建議再一次離心和取上清,建議分裝后-80℃凍存,避免反復凍存血漿:含抗凝劑(EDTA、肝素,具體采取哪種抗凝劑,參考說明書)的**管**,,離心20min(4℃,2000g),取上清,建議再一次離心和取上清,建議分裝后-80℃凍存,避免反復凍存細胞裂解液:收集細胞,PBS清洗后,離心10min(1000g,4℃),棄去上清,加入適量裂解液(107細胞對應200-300ul裂解液),放置于4℃冰箱(20min),離心10min(3000g,4℃),取上清,建議再一次離心和取上清,測定BCA總蛋白濃度,-80℃保存組織裂解液:適量RIPA裂解液加入組織中(10mg對應100-200ul裂解液),組織破碎器處理組織至勻漿(冰上處理),放置于4℃冰箱(20min),離心10min(3000g,4℃),取上清,建議再一次離心和取上清,測定BCA總蛋白濃度,-80℃保存細胞上清:離心,取上清,建議分裝后-80℃凍存,避免反復凍存IL-17D檢測服務電化學發光,一種在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應,是電化學和化學發光兩個過程的完美結合。
LUMINEX常見問題及解答(二)6)客戶自己提供抗體,是否可以進行LUMINEX檢測?Luminex和ELISA檢測試劑都需要兩個配套的特異性抗體。我們公司具有開發Luminex試劑盒的經驗。但是,需要一系列的開發工作才能保證結果的特異性、重復性和可靠性。7)除了蛋白,LUMINEX技術是否還可以用于其它指標的檢測?可以用于基因表達,基因多態性和HLA配型分析。8)如何判定LUMINEX數據表達水平差異有無意義?表達差異主要取決于標本的性質和數量,我們公司為客戶提供專業的數據統計服務。9)LUMINEX實驗和流式細胞儀的優劣比較?Luminex技術是流式細胞儀和微球相結合的蛋白、核酸檢測技術,檢測對象是蛋白質、DNA等大分子。普通流式細胞儀主要用于檢測整體細胞表面或細胞內的蛋白表達情況。Luminex檢測蛋白和標本數目大,是一種高通量檢測技術。普通流式細胞儀每次只能檢測幾種蛋白分子,而且檢測速度較慢,不適合高通量分析。由此可見,兩種方法應用方向有很大差別。
單細胞功能組學(IsoPlexis)技術優勢>在看似同質的細胞亞群內研究異質性>利用功能蛋白質數據層和免疫細胞比較免疫應答情況>通過多功能強度指數(PSI)建立參考點>優化試驗以預測區分應答者和非應答者>表征導致身體狀況/應答的生物學和功能驅動因素技術原理采用微流控技術,通過12,000個亞納升級別的微室同時捕獲上千個單細胞。搭配IsoCode芯片抗體條形碼技術,捕獲每個小室中單個活細胞分泌的多重蛋白質,或者對單細胞裂解后釋放出的多種磷酸化蛋白進行捕獲,然后通過基于ELISA原理的全自動化蛋白檢測技術,捕獲多重蛋白的熒光信號,一次可采集多達30種以上的功能蛋白質。在檢測中從每個單細胞獲得的蛋白質組信號將無縫傳輸到IsoSpeak生信分析軟件,進行全自動分析和可視化呈現,并可直接用于文章發表。LabEx提供多音字檢測服務!
PCRArray技術優勢:嚴格的質控●多個管家基因選擇,保證內參穩定性●基因組污染質控●逆轉錄質控●PCR質量質控極高的靈敏度●非常敏感的測定●25ng-5ugtotalRNA檢測一塊96孔板●500ng核酸可檢測到99%的基因●極限可達到1ng,啟用預擴增方案高靈敏度和寬動態范圍●寬動態范圍,以適應不同水平的初始基因表達高度特異性●每一對引物都經過濕實驗驗證,單峰解離曲線確?!耠y以設計特異性引物的基因具有高度特異性穩定的重現性●不同的操作者,不同的儀器都呈現較好的重現性提供專業的實驗服務和完整的實驗報告●試劑打包:只需提供樣本,試劑+檢測一站式服務●技術支持:實驗中任何問題均可得到對應技術解答●實驗報告:提供完整的實驗結果和和完整的實驗報告(包括實驗材料實驗步驟等)可檢測多種類型的樣本:生物標志物開發與研究。生物標志物檢測
流式細胞術(flow cytometry,FCM)是一項新型的、發展迅速的生物醫學分析技術。mrna的生物學功能檢測服務
基于流式平臺CBA:CBA(CytometricBeadArray),即微量樣本多指標流式蛋白定量技術是一個基于流式細胞檢測系統的多重蛋白定量檢測方法,它能夠同時對單個樣品中的多個指標進行檢測。CBA的原理通過利用一系列帶有熒光標記的微小、分散的微球連接特定的捕獲抗體以捕捉溶液系統中的待測物,通過對應各種不同檢測物的特異微球上所帶有熒光強度不同從而同時測定分析樣本中多種可溶性成分的數量。CBA的特點:1.能夠同時對單個樣本進行多種檢測。2.較傳統檢測節省樣本量9倍。3.靈敏度高、重復性好。4.所有分析只需一組標準曲線。5.避免酶聯反應所致人工假象。6.節省操作和檢測時間。mrna的生物學功能檢測服務
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