多重熒光免疫組化，主要的技術原理來自TSA技術，TSA即酪酰胺信號放大技術(Tyramidesignalamplification)，是一類利用辣根過氧化酶（HRP）對靶蛋白或核酸進行高密度原位標記的酶學檢測方法。該技術可與高性能染料AlexaFluor、傳統熒光染料和比色檢測系統相兼容。簡單來說，用這種方法做多重免疫熒光是利用二抗上帶有的HRP（而不是直接偶聯熒光素），來催化后續添加入體系的非活性熒光素。熒光素在HRP和過氧化氫的作用下被活化，跟臨近蛋白的酪氨酸殘基共價偶聯，使得蛋白樣品與熒光素穩定結合。然后微波處理，前一輪非共價結合的抗體被洗掉，共價結合的熒光素還留存在樣品上。再換個一抗來第二輪孵育，周而復始。等到所有抗體孵育結束，熒光素都結合好后，然后去檢測結果。LabEx提供 mTOR、JNK、EGFR、STAT等磷酸化率測定。egfr信號傳導通路檢測服務

HALO分析平臺LabEx始終致力于為您的研究需要，提供前沿的多因子技術平臺，用心服務，現有囊括基因、蛋白、組織、細胞水平包括PCRArray、ELISA，MSD、Luminex、CBA，抗體芯片、多色流式、mIHC及HALO分析等12個專業的實驗室技術平臺，助推科研進步！技術介紹LabEx數字病理圖像分析平臺，為您提供病理圖像分析的全套解決方案，包括可進行高通量、全切片式的組織分析的圖像分析的病理圖像分析平臺HALO。憑借其易用性和可擴展性，在免疫腫塊物學、腫塊物學、移植科學、神經科學、眼科、代謝、呼吸和病理學等領域有著較廣的應用。目前HALO數字病理圖像分析平臺用戶遍布于全球的生物制藥公司、醫療和研究組織。ras mapk信號通路檢測服務LabEx提供液態流式技術(Luminex)服務！

產生組織切片非特異性染色的原因有哪些？如何解決？1)、抗體孵育時間過長、抗體濃度高易增加背景著色。這可通過縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是尤其重要的一條。2)、一抗用多克隆抗體易出現非特異性著色，建議試用單克隆抗體看看。3)、內源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高（含血細胞多的組織），需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色；4)、非特異性組分與抗體結合，這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當增加濃度來加強封閉效果；5)、DAB孵育時間過長或濃度過高；6)、PBS沖洗不充分，殘留抗體結果增強著色，在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤為重要；7)、標本染色過程中經常出現干片，這容易增強非特異性著色。

多重熒光免疫組化技術優勢1.由于每次體系中都只有單一抗體孵育，因此無需擔心抗體交叉反應，以及一抗二抗種屬匹配問題，減少了實驗設計時不同種屬抗體選擇匹配的限制。2.TSA技術可以用于檢測用傳統方法無法檢出的低豐度靶標。基于酪酰胺的信號放大技術能夠提供極強的敏感度、檢測極微量的目的抗原。極大的降低抗體的用量，節約抗體，實測確實可以提升抗體的稀釋比例。3.熒光法多重免疫組化，可同時進行五個顏色通道以上，這種情況下發射光譜會重疊，我們可以借助多光譜成像系統來解決這個問題。這是傳統間接熒光法染色和顯色法多重免疫組化所做不到的。這種方法能真實反映關鍵蛋白的表達情況和相互之間的關系，從而極大地節約珍貴的樣品。生物標志物開發與研究。

免疫組化，是應用免疫學基本原理——抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(immunocytochemistry)。LabEx提供IHC/ICC（免疫組化/免疫熒光）實驗服務，提供樣本細胞涂片、細胞爬片、組織冰凍切片、組織石蠟切片；或組織、蠟塊均可。一抗（可幫忙提供，費用另計）。LabEx實驗服務項目涵蓋：基因蛋白細胞組織四個層面。ras mapk信號通路檢測服務

多因子實驗的正式實驗，可以分批次檢測。egfr信號傳導通路檢測服務

LUMINEX常見問題及解答（一）1)LUMINEX應用于哪些領域?生物醫學研究，生物標記物開發，臨床檢測等領域。Luminex技術主要用于蛋白和核酸檢測分析。2)LUMINEX敏感性如何？靈敏度取決于開頭的質量。對于同樣的抗體對，Luminex檢測的靈敏度高于ELISA技術。一般檢測靈敏度在pg級。3)對不同類型的樣品制備和樣品量的要求是怎樣的？血清、血漿是常用的樣本，每次檢測需要10ul，每次可以檢測多個蛋白。從各種細胞或組織中提取的蛋白也可以用Luminex技術檢測，制備方法與ELISA、WesternBlot完全一樣。4)一般可以檢測到多少基因或蛋白的表達信息？檢測蛋白和基因的數目主要取決于試劑盒。蛋白質檢測目前可以達到50個左右，基因檢測可達500個。5)如何保證檢測結果的特異性？檢測的特異性取決于抗體高特異性。試劑幾乎全部來源于美國大公司，產品經過了嚴格的質量控制。同時，我們檢測公司也有近15年的經驗、嚴格的操作程序和質量控制體系。egfr信號傳導通路檢測服務

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