抗體芯片實驗室服務思考留給科研,實驗外包出去!抗體芯片是蛋白芯片的一種,具有微型化、集成化、高通量化的特點,可以用于檢測某一特定的生理或病理過程相關蛋白的表達豐度,目前主要用于信號轉異、蛋白質組學、**及其他疾病的相關研究。抗體芯片檢測的樣本類型包括提取物、細胞培養上清、血清血漿等,檢測的方式通過生物素標記的方法完成樣本標記,然后芯片孵育,樣本中相關蛋白與芯片上特異性抗體結合,通過熒光的方式使用芯片掃描儀檢測。實驗獲得的數據將通過標準的數據處理流程進行分析。抗體芯片檢測的優點:靈敏度高、特異性好、重復性佳、準確性高抗體芯片的檢測內容包括:抗體芯片主要用于蛋白表達譜、蛋白質磷酸化及蛋白質相互作用等檢測本panel可檢測以下因子:GLP-1 (active),Glucagon,Insulin 種屬:Human。流式細胞術臨床應用
1)LUMINEX應用于哪些領域?生物醫學研究,生物標記物開發,臨床檢測等領域。Luminex技術主要用于蛋白和核酸檢測分析。2)LUMINEX敏感性如何?靈敏度取決于開頭的質量。對于同樣的抗體對,Luminex檢測的靈敏度高于ELISA技術。一般檢測靈敏度在pg級。3)對不同類型的樣品制備和樣品量的要求是怎樣的?血清、血漿是常用的樣本,每次檢測需要10ul,每次可以檢測多個蛋白。從各種細胞或組織中提取的蛋白也可以用Luminex技術檢測,制備方法與ELISA、WesternBlot完全一樣。4)一般可以檢測到多少基因或蛋白的表達信息?檢測蛋白和基因的數目主要取決于試劑盒。蛋白質檢測目前比較高可以達到50個左右,基因檢測比較高達500個。5)如何保證檢測結果的特異性?檢測的特異性取決于抗體高特異性。試劑幾乎全部來源于美國大公司,產品經過了嚴格的質量控制。同時,我們檢測公司也有近15年的經驗、嚴格的操作程序和質量控制體系。6)客戶自己提供抗體,是否可以進行LUMINEX檢測?Luminex和ELISA檢測試劑都需要兩個配套的特異性抗體。我們公司具有開發Luminex試劑盒的經驗。但是,需要一系列的開發工作才能保證結果的特異性、重復性和可靠性。美天旎磁珠分選 官網電化學發光,一種在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應,是電化學和化學發光兩個過程的完美結合。
液相懸浮芯片技術產品多因子技術可同時檢測多個樣本的多個指標,如通路中多個相關蛋白的共檢測。雖然液相蛋白定量檢測的技術很多,但是大多數的技術能對樣本進行單一指標的檢測,同時檢測多個指標時則需要提供大量的樣本分批檢測,操作繁瑣,且各指標間差異性較大。對于樣本量較少或需要對比各指標的用戶,傳統的技術無法滿足需要。日常實驗中,常需對溶液體系中的可溶性蛋白進行定量檢測,如細胞培養上清或血清中的細胞因子含量的定量分析,由于這些因子的含量較少,低于一般常規方法的檢測下限,使用常規的蛋白檢測方法如WesternBlot等很難檢測。而多因子技術樣本需求量少(25~60μL/孔),檢測指標多,可兼容血清/血漿,細胞上清,細胞/組織裂解液,腦脊液等多種生物學體液。其靈敏度高(部分panel可達到亞fg/ml),寬線性范圍(達到6個log),具有高重復性(板內CV<6-8%,板間<10%,批間<15%),適宜多類型指標的同時測定(炎癥,趨化,代謝……)。
問:因子檢測技術有哪些?答:Array抗體芯片、CBA、luminex、MSD。問:多因子實驗適用的樣本類型有哪些?答:Serum(血清)、 sma(血漿)、Cell/Tissuelysate(細胞/組織裂解液)、CerebrospinalFluid(腦脊液)、BronchoalveolarLavageFluid(支氣管肺泡灌洗液)、NasalLavage(鼻腔灌洗液)Fluid、PeritonealFluid(腹腔液)等等。問:如何計算96孔板可做多少樣本?答:標曲16孔,預實驗8孔,剩余72孔,單孔可做72樣本,復孔可做36樣本;問:多因子實驗的正式實驗,是否可以分批次檢測?答:可以,但是有如下要注意:(1)CBA:試劑盒須在一個月內用完,否則標準曲線要重做,重做就要用到試劑,那樣本就樣減少。(2)Luminex:每次都必須要做標準曲線,會浪費試劑和孔板,同時試劑也要在一個月內用完,防止試劑過期。(3)MSD:每次都必須要做標準曲線,會浪費試劑和孔板,同時試劑在一個月內用完,防止試劑過期,每次送樣+標準曲線的數量,比較好是4的倍數,否則會造成浪費。本panel可檢測以下因子:GM-CSF,IFN-γ,IL-10,IL-2,IL-4,IL-6,IL-8/CXCL8,TNF-α 種屬:Human。
本panel可檢測以下因子:CTACK,ENA-78,Eotaxin,Eotaxin-2,Eotaxin-3,EPO,FLT3L,Fractalkine,G-CSF,GM-CSF,GRO-α,I-309,IFN-α2a,IFN-β,IFN-γ,IL-1α,IL-1β,IL-1RA,IL-2,IL-2Rα,IL-3,IL-4,IL-5,IL-6,IL-7,IL-8,IL-9,IL-10,IL-12/IL-23p40,IL-12p70,IL-13,IL-15,IL-16,IL-17A,IL-17A/F,IL-17B,IL-17C,IL-17D,IL-17E/IL-25,IL-17F,IL-18,IL-21,IL-22,IL-23,IL-27,IL-29/IFN-λ1,IL-31,IL-33,IP-10,I-TAC,MCP-1,MCP-2,MCP-3,MCP-4,M-CSF,MDC,MIF,MIP-1α,MIP-1β,MIP-3α,MIP-3β,MIP-5,SDF-1α,TARC,TNF-α,TNF-β,TPO,TRAIL,TSLP,VEGF-A,YKL-40種屬:Human本panel可檢測以下因子:Akt,GSK-3β,p70S6K 種屬:Human,Mouse,Rat。mapk信號通路圖
本panel可檢測因子:Complement C9,Complement factor D,CRP,ICAM-1,NGAL/LCN2,SAA,VCAM-1 種屬:Human。流式細胞術臨床應用
Luminex液相懸浮芯片是基于高通量微孔板的多重檢測抗體芯片技術。其基本原理是將高度特異的捕獲單克隆抗體偶聯到不同熒光標記的磁珠上,將不同種類磁珠混合后懸浮于96孔微孔板中。在檢測時,一束激光照射磁珠上的熒光,識別磁珠標記的捕獲抗體,從而獲知該磁珠可檢測哪種細胞因子,從而實現“定性”作用。進一步,通過加入生物素標記的高親和配對檢測抗體,同步識別磁珠抓取的目標細胞因子,形成“三明治”結構,并加入SA-PE偶聯上生物素,通過另一束激光照射進行信號放大檢測,實現“定量”作用。流式細胞術臨床應用
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