抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,并進行初步應用。方法采用B淋巴細胞雜交瘤技術制備抗熒光素單克隆抗體;制備腹水,經50%硫酸銨粗提后,再經陰離子交換樹脂DE52進一步純化單克隆抗體;采用氧化共沉淀法制備納米磁性粒子;乳液聚合法制備羧基磁性微球;用碳二亞胺將抗熒光素單克隆抗體共價偶聯于磁性微球表面,制備抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠。用制備的免疫磁珠檢測乙肝表面抗原,并與市售ELISA試劑盒的檢測結果進行比較。結果共獲得5株雜交瘤細胞株,其中1F12細胞株分泌的抗體效價、相對親和力較高,特異性較好;純化的1F12株單抗的純度達95%,蛋白含量為2.4mg/ml,ELISA效價為106,相對親和力為0.2mg/L,與FITC標記的BSA可特異性結合;納米磁性粒子的平均粒徑為150nm,鐵含量為71.63%;羧基磁性微球的平均粒徑為210nm,羧基含量約為2.15mmol/g;每克羧基磁性微球可結合抗熒光素單克隆抗體約12mg,制備的免疫磁珠可有效結合熒光素標記的蛋白。應用抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠檢測乙型肝炎表面抗原的靈敏度高于ELISA試劑,檢測限達0.1ng/ml。結論成功制備了抗熒光素單克隆抗體免疫磁珠,其具有應用于免疫檢測分析的價值。免疫磁珠的優點有很多。湖南蛋白質免疫共沉淀免疫磁珠哪家好
COIP常見問題及對策1：如何提高抗體與磁珠結合效率?磁珠與抗體的結合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關，請確認抗體的類型與ProteinA/G配基的親和效率。如抗體所屬亞型與ProteinA/G的親和度較低，可以通過增加抗體與磁珠的孵育時間（30～120min）、提高結合緩沖液的pH值（8～9）及降低離子強度（25～100mMNaCl）等方法提高親和效率。2：如何提高磁珠在免疫沉淀反應中的特異性?可以先將抗體與樣品進行孵育，形成抗體-抗原復合物，再用ProteinA/G磁珠捕獲復合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結合效率，并降低磁珠與樣品接觸的時間，從而提高沉淀產物的特異性。對于蛋白質/核酸共沉淀或染色質免疫共沉淀也推薦使用此法。廣東protein A/G COIP免疫磁珠哪家好上海普平生物科技有限公司主做免疫磁珠的批發銷售。
精原干細胞(spermatogonialstemcells,SSCs)富集純化是利用SSCs進行基因修飾新方法等研究的前提基礎。采用免疫磁珠分選法,使用干細胞抗體CD90.2進行小鼠SSCs的純化富集,并采用流式細胞分析法和定量PCR驗證了磁珠分選效率。流式細胞分析結果:免疫磁珠分選后SSCs純度為50.11%。熒光定量PCR檢測結果:磁珠分選后支持細胞特異表達基因GATA4***下調(6倍)、SSCs表達基因GFRα-1上調(6.5倍)、生殖干細胞特異表達基因OCT4極***上調(5.9倍),3個基因相對表達量的變化說明,免疫磁珠分選效率為6倍。流式細胞分析法所產生的偏差可能是受到了未解離磁珠及SSCs本身轉基因熒光的影響。
COIP實驗步驟第三步：免疫共沉淀根據不同的抗體結合方式，這里的免疫共沉淀步驟會稍有不同，但是本質是一樣的，都是為了形成抗原-蛋白復合物。如果直接使用 Protein A/G 結合的 beads，先進行細胞裂解液/蛋白混合物與抗體的孵育，再加入 beads 將蛋白-抗體復合物拉下來。如果使用了交聯劑將抗體與 Protein A/G 固定，或者直接將抗體固定在 beads，則將固定抗體的 beads 與細胞裂解液或則蛋白混合物一起孵育。增加在洗脫之前的洗滌次數或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ，可以降低非特異性結合，以防止蛋白在陰性對照樹脂實驗樣品中被檢測到。第四步：洗脫與檢測***一步則是使用洗脫緩沖液將互作蛋白復合物洗脫，并通過 Western Blot 或者 Mass spectra 檢測鑒定蛋白。當蛋白或抗體對低 pH 的緩沖液敏感，可使用中性 pH 值的洗脫緩沖液。注意事項：如后續需進行酶活或功能性分析，則需使用兼容下游檢測的 Elution buffer 進行洗脫。對于交聯劑結合的 beads，為了保持抗體偶聯樹脂的活性，應立即再生和存儲樹脂，保證抗體可以重復利用。您喜歡免疫磁珠的這些特點嗎？
從白血病KG1a細胞中分選CD34+CD38-干細胞并研究其生物學特性.方法免疫磁珠法分選CD34+CD38-細胞,流式細胞術分析細胞表面膜抗原,細胞周期,甲基纖維素培養體系觀察其克隆性;以HL60,K562,CD34+CD38+細胞為對照,甲基偶氮唑藍法檢測柔紅霉素對CD34+CD38-細胞的抑制作用;BALB/c裸鼠皮下接種,觀察體內成瘤能力.結果分選的CD34+CD38-細胞純度達95%以上,(69.03±3.25)%處于G0期,克隆形成率為(38.64±2.68)%,明顯抵抗柔紅霉素;不同濃度柔紅霉素作用后,CD34+CD38-,CD34+CD38+,HL60,K562細胞的活性差異有統計學意義(F=961.136,P=0.000);CD34+CD38-在裸鼠皮下成瘤率***高于CD34+CD38+細胞(P〈0.05).結論免疫磁珠法分選白血病干細胞簡單易行,分選的細胞符合白血病干細胞生物學特性.上海普平生物科技有限公司從事免疫磁珠供應。廣東protein A/G COIP免疫磁珠哪家好
免疫磁珠的好處您了解嗎？湖南蛋白質免疫共沉淀免疫磁珠哪家好
分離轉基因小鼠骨髓造血干細胞.運用針對小鼠干細胞表面特異表達的干細胞抗原-1(stemcellantigen-1,Sca-1)的單克隆抗體和包被于磁顆粒表面的第二抗體,采用磁吸附細胞分選方法(MACS)分離小鼠骨髓造血干細胞,用流式細胞術(FACS)檢測MACS分離后骨髓細胞中干細胞(Sca-1陽性細胞)比例,監測細胞分選效果.結果顯示MACS分離后骨髓細胞中Sca-1陽性細胞所占比例達85%以上,涂片觀察發現細胞組成和細胞形態學特征與FACS所得結果一致.MACS可以從轉基因小鼠全骨髓細胞中分離出Sca-1陽性的骨髓造血干細胞,細胞純度可達85%以上.湖南蛋白質免疫共沉淀免疫磁珠哪家好
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