功能性ELISA是一類以ELISA形式進行的、基于體外配體結合的分析法。該方法用于檢測目的蛋白與其天然結合物配體之間(如生長因子與其受體)的結合能力。如果在該檢測中生長因子能夠與其天然受體相結合,則該生長因子很可能是具有功能的。ED50為OD值讀取過程中能夠提供50%信號強度的生長因子濃度(在包被了受體的平板上)。重組蛋白使用了基于細胞的檢測分析或功能性ELISA分析對其生物學活性進行了檢測,產品頁上會提供相應的ED50值。也有些重組蛋白沒有提供生物活性數據。在大多數情況下,這表明沒有進行生物活性測試,但它并不一定意味著蛋白是沒有活性的。在沒有生物活性數據的情況下,這些蛋白可用做蛋白質分子量標準,蛋白免疫印記陽性對照(如果是全長的重組蛋白)或免疫原。其它可能的用途是配體結合試驗或ELISA的標準品。進口重組蛋白品牌有哪些?無動物源性MMP-8重組蛋白
蛋白的溶解性與很多因素有關,其中比較重要的是pH值和離子強度。購買的重組蛋白按照說明上所標明的溶解液來溶解。如果您所用的溶解液的pH值和離子強度與說明書中所標明的不符,很多時候會造成細胞因子或重組蛋白不能完全溶解或者根本無法溶解,這樣所配得的細胞因子或重組蛋白必然活性不夠或喪失。重組蛋白溶解時一定要溶解到指定的濃度,高于或低于該濃度范圍,都可能會導致重組蛋白不穩定,出現活性下降的現象。另外,重組蛋白在溶解時,一定不能用渦旋儀進行快速振蕩,以免出現蛋白鏈斷裂。重組蛋白的凍干粉是非常容易溶解的,一般用移液器的吸頭輕輕吹幾下,即可使細胞因子或重組蛋白完全溶解。大鼠IL-2重組蛋白定制進口重組蛋白質量好,能保證實驗結果。
重組蛋白的細菌表達系統有各種各樣的載體和宿主菌可供選擇,大部分工程菌的增殖時間短,不僅便于快速評價實驗結果,而且降低了技術和設備無菌要求的嚴格性。無害大腸桿菌是腸道正常微生物群的一部分與生物體為共生關系,可以通過產生維生素K 2使機體受益,并防止病原菌在腸道增殖。大腸桿菌是用于重組蛋白生產的宿主菌,它不僅具有遺傳背景清楚、培養操作簡單、轉化和轉導效率高、生長繁殖快、成本低廉,可以快速大規模地生產目的蛋白等優點,而且其表達外源基因產物的水平遠高于其它基因表達系統,表達的目的蛋白量甚至能超過細菌總蛋白量的30%,對小分子蛋白的生產具有極大的優勢,因此大腸桿菌是目前應用多的重組蛋白質表達系統。
蛋白質生物學不僅包含研究內容,也包含了研究所需的工具。即基于蛋白質結構及功能的研究,和利用抗體、蛋白及多肽等作為純化、檢測和分析生物系統的工具。有些蛋白分析方法(如western blotting和ELISA等)已作為實驗室的常規實驗方法使用了多年。其它方法如定量蛋白質譜的實驗方法則是相對較新的實驗技術,并且正在快速發展中。針對重組蛋白純化,賽默飛提供種類豐富的標簽選擇,包括6xHis, GST, DYKDDDDK (FLAG), c-myc, 和 HA。還提供一系列磁珠和樹脂等純化產品,磁珠、磁性瓊脂糖、散裝樹脂、離心柱或試劑盒,FPLC層析柱,96孔過濾板等,用于從大腸桿菌、酵母、昆蟲或哺乳動物表達系統中純化從微克(μg)到低千克(kg)級重組蛋白。可滿足大多實驗的需求,包括高通量篩選、批量處理、中試和工藝純化等。外企的重組蛋白藥物占據了全球將近60%的醫藥市場份額。
在科研實驗中,重組蛋白的生物學活性通常以ED50來表示。在大多數情況下,研究人員一般基于各類指示性細胞——如某些原代細胞或細胞系——來開展生物分析。常用的生物分析法包括細胞增殖分析,細胞趨化性分析,細胞因子生成分析和細胞毒性分析。通常以ED50來表示某一細胞因子的生物活性,該值表示能夠誘發50%大效應的細胞因子濃度。這一表示效價的方法適用于那些劑量效應曲線為S形的細胞因子。ED50被定義為處于max反應50%水平的細胞因子濃度。這一表示現效價的方法適用于那些劑量效應曲線為S形的細胞因子。將ng/mL單位的ED50活性值(注意:如當前為pg/mL,請先換算為ng/mL)轉換為(注意:如需當前單位為pg/mL,請先換算為ng/mL)單位/毫克(unit/mg)特定活性值的公式為(當ED50表示為處于一個范圍區間時,選擇此范圍的中點值):1 x 10E6/ED50* (ng/mL) = 以單位/毫克(Units/mg蛋白)表示為單位的特定蛋白特定活性。重組蛋白的生物學活性定義。無動物源性CXCL1重組蛋白
不同的重組蛋白系統有不同的優缺點。無動物源性MMP-8重組蛋白
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