高分辨率熔解(High-resolutionmelting,簡稱HRM)分析是一門新興的技術(shù)。它通過PCR之后的熔解曲線分析,就能檢測PCR片段的微小序列差異,從而應(yīng)用在突變掃描、序列配對和基因分型等多個方面。憑借其速度和簡便性,高分辨率熔解這種方法正在迅速普及。其實雙鏈DNA的熔解分析可追溯到上世紀(jì)六十年代,當(dāng)時是通過紫外吸收來監(jiān)測的。分析需要幾微克的DNA,而樣品以0.1-1.0°C/分鐘的速率緩慢加熱,常常要花上幾個小時才能完成。后來,LightCycler定量PCR儀的出現(xiàn),讓熒光熔解分析變得流行。樣品量因毛細(xì)管而縮減至納克級,且熔解速率更快,達(dá)0.1-1.0°C/秒,這樣熔解時間縮短至幾分鐘。當(dāng)時使用的染料是SYBR?GreenI。但是只要這個突變?nèi)簺]有達(dá)到總?cè)后w的1%,它就只是一個突變株/系。達(dá)到了1%就是多態(tài)性了。浙江微衛(wèi)星標(biāo)記strSNP分型公司
《CandidateGenePolymorphismsandtheirAssociationwithGlycogenContentinthePacificOysterCrassostreagigas》本文作者在野生群體中進(jìn)行了候選基因關(guān)聯(lián)分析,選擇90個候選基因以及295個SNP位點,并且結(jié)合目標(biāo)基因捕獲測序分型732個SNP位點。發(fā)現(xiàn)Cg_GD1基因(glycogendebranchingenzyme)中的兩個SNP位點(Cg_SNP_TY202andCg_SNP_3021)inCg_GD1(glycogendebranchingenzyme)和Cg_GP1基因(glycogenphosphorylase)中的一個SNP位點(Cg_SNP_4)與糖原含量相關(guān),基因表達(dá)量分析顯示這兩個基因在高糖原與低糖原中的表達(dá)量也有比較明顯差異。山東STR/SSR基因SNP分型周期主要特點是準(zhǔn)確性高、靈活性強(qiáng)、通量大,主要方法是TaqMan探針法。
1.TaqMan探針法針對染色體上的不同SNP位點分別設(shè)計PCR引物和TaqMan探針,進(jìn)行實時熒光PCR擴(kuò)增。探針的5’-端和3’-端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。當(dāng)溶液中存在PCR產(chǎn)物時,該探針與模板退火,即產(chǎn)生了適合于核酸外切酶活性的底物,從而將探針5’-端連接的熒光分子從探針上切割下來,破壞兩熒光分子間的PRET,發(fā)出熒光。通常用于少量SNP位點分析。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司按公司利用的就是此方案。公司公眾號:上海翼和生物
3、SNP等位基因頻率的容易估計。采用混和樣本估算等位基因的頻率是種高效快速的策略。該策略的原理是:首先選擇參考樣本制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后將待測的混和樣本與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較,根據(jù)所得信號的比例確定混和樣本中各種等位基因的頻率。4、易于基因分型。SNPs的二態(tài)性,也有利于對其進(jìn)行基因分型。對SNP進(jìn)行基因分型包括三方面的內(nèi)容:(1)鑒別基因型所采用的化學(xué)反應(yīng),常用的技術(shù)手段包括:DNA分子雜交、引物延伸、等位基因特異的寡核苷酸連接反應(yīng)、側(cè)翼探針切割反應(yīng)以及基于這些方法的變通技術(shù);(2)完成這些化學(xué)反應(yīng)所采用的模式,包括液相反應(yīng)、固相支持物上進(jìn)行的反應(yīng)以及二者皆有的反應(yīng)。(3)化學(xué)反應(yīng)結(jié)束后,需要應(yīng)用生物技術(shù)系統(tǒng)檢測反應(yīng)結(jié)果。多態(tài)性是一個群體概念,多態(tài)性指這個差異占群體的1%以上。否則就叫突變(小于1%)。
SNP(單核苷酸多態(tài)性)是,新發(fā)展起來的第三代分子標(biāo)記技術(shù),具有分布廣,多態(tài)信息量大,易于檢測和統(tǒng)計分析等特點.目前,SNP技術(shù)在水稻,玉米,大豆等作物研究中應(yīng)用較多.本文綜述該技術(shù)在這些作物的遺傳標(biāo)記,分子標(biāo)記輔助選擇,構(gòu)建高密度遺傳連鎖圖譜,繪制EST圖譜等方面的研究進(jìn)展.上海翼和**團(tuán)隊富有開創(chuàng)精神,朝氣蓬勃,在肖君華博士的帶領(lǐng)下,秉承“專業(yè)、協(xié)作、進(jìn)取”的企業(yè)精神,為科研用戶提供性價比高、可靠的遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品。理論上講,SNP既可能是二等位多態(tài)性,也可能是3個或4個等位多態(tài)性。浙江微衛(wèi)星標(biāo)記strSNP分型公司
突變一般不是一個個體全部細(xì)胞的變化。浙江微衛(wèi)星標(biāo)記strSNP分型公司
從對生物的遺傳性狀的影響上來看,cSNP又可分為2種:一種是同義cSNP(synonymouscSNP),即SNP所致的編碼序列的改變并不影響其所翻譯的蛋白質(zhì)的氨基酸序列,突變堿基與未突變堿基的含義相同;另一種是非同義cSNP(non-synonymouscSNP),指堿基序列的改變可使以其為藍(lán)本翻譯的蛋白質(zhì)序列發(fā)生改變,從而影響了蛋白質(zhì)的功能。這種改變常是導(dǎo)致生物性狀改變的直接原因。cSNP中約有一半為非同義cSNP。上海翼和**團(tuán)隊富有開創(chuàng)精神,朝氣蓬勃,在肖君華博士的帶領(lǐng)下,秉承“專業(yè)、協(xié)作、進(jìn)取”的企業(yè)精神,為科研用戶提供性價比高、可靠的遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品。浙江微衛(wèi)星標(biāo)記strSNP分型公司
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