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來源: 發布時間:2021-10-22

DNA甲基化是表觀遺傳學的重要內容。DNA甲基化是基因組DNA的一種主要表觀遺傳修飾形式。DNA甲基化修飾對于維持正常細胞功能、傳遞基因組遺傳印記、胚胎發育以及人類tumour發生,起著至關重要的作用。甲基化研究成為表觀遺傳學的熱點,相應的技術也是層出不窮,根據實驗目的的不同,這些技術大體能夠分成兩類:全基因組甲基化檢測技術以及特異性位點甲基化檢測技術。翼和特色內容目標區域甲基化測序自主知識產權超高重PCR為基礎,目標甲基化區段特異性捕獲,更具針對性,經濟型基于二代測序,可以獲得目標區域內所有C的甲基化數據~500X的測序深度,精確計算每個位點C的甲基化程度通量高,可同時對成百上千個區域進行甲基化程度分析適用于大樣本多區域的DNA甲基化水平檢測Q30>80%檢出率90%以上,90%以上測序片段測序深度>10X。DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非編碼區,DNA高度甲基化首先會影響DNA結構,引起基因沉默。蘇州bisulfite甲基化重測序哪里好

DNA甲基化作為一種重要的表觀修飾,在調控基因的時空特異性表達中扮演著關鍵的角色,參與了X染色體失活、基因組印記和重復序列抑制等諸多生命過程。哺乳動物細胞的DNA甲基化主要發生在CpG二核苷酸對的C(胞嘧啶)上,并在有絲分裂過程中得以相對穩定的維持,這對細胞保持譜系特性有著重要的意義。上海翼和應用生物技術有限公司自主研發的Hi-MethylSeq技術,可對對大規模群體的候選基因甲基化水平進行檢測。上海翼和生物是上海市遺傳學會理事單位。江蘇bisulfite甲基化重測序分析在基因組的某些區域中,通常位于基因的啟動子區,CpG 序列密度很高,可以達均值的5 倍以上。

DNA甲基化即在DNA上增加甲基基團,是使基因的轉錄抑制或沉默的主要方式。該修飾特異性地發生在CpG位點,胞嘧啶通過磷酸鹽與鳥苷酸連接(圖1)。甲基基團的插入改變了DNA的表觀和結構,可能會直接阻礙DNA的識別及與轉錄因子的結合,或者吸引其他因子優先與DNA結合,干擾轉錄因子的結合。目前已鑒定了三個與甲基化DNA結合的蛋白家族,包括MBD蛋白、Kaiso和Kaiso樣蛋白、以及SRA蛋白。通過招募這些蛋白,DNA甲基化可促進某些組蛋白狀態的維持,如去乙酰作用,從而保持轉錄后的組蛋白修飾。例如,MBD家族的甲基CpG結合蛋白2(MeCP2)與甲基CpG結合,招募HDACs,可促使染色體濃縮和轉錄抑制。

DNA甲基化是研究 為普遍的表觀遺傳修飾,它被認為在許多生物學過程和疾病中有著重要的作用。隨著測序技術的快速發展,二代測序與重亞硫酸鹽處理基因組DNA相結合產生了可以在全基因組單堿基水平上測量DNA甲基化水平的全基因組重亞硫酸鹽測序(whole-genome bisulfite sequencing,WGBS)技術。WGBS的流程與全基因組DNA測序主要區別于DNA文庫的構建。以MethlyC-seq為例,將DNA 段化后收集特定長度的片段并修復DNA末端,再將雙端加上3′-dAMP然后連接上甲基化的接頭,接著用重亞硫酸鹽處理DNA使未甲基化的胞嘧啶(C)轉化為尿嘧啶(U), 終進行低循環數的PCR擴增后完成建庫,建庫完后上機測序,得到原始數據(fastq文件)后,完成一定的質量控制后就可以進行mapping分析。亞硫酸鹽處理這種方法可靠,且精確度高,能明確目的片段中每一個CpG位點的甲基化狀態。

DNA甲基化(DNA methylation)為DNA化學修飾的一種形式,能夠在不改變DNA序列的前提下,改變遺傳表現。所謂DNA甲基化是指在DNA甲基化轉移酶的作用下,在基因組CpG二核苷酸的胞嘧啶5號碳位共價鍵結合一個甲基基團。大量研究表明,DNA甲基化能引起染結構、DNA構象、DNA穩定性及DNA與蛋白質相互作用方式的改變,從而控制基因表達。WGBS是基于重亞硫酸鹽的甲基化分析方法,首先通過Bisulfite對樣本DNA進行處理,將未甲基化的C堿基轉化為U堿基,而甲基化的C堿基則不會改變,進行PCA擴增后U堿基會變成T,與原本甲基化的C堿基區分開,再結合高通量測序技術,可繪制單堿基分辨率的全基因組DNA甲基化圖譜。Hi-Methylseq結合了亞硫酸鹽轉換、靶向擴增子高通量測序技術,可實現 多區段、多位點的甲基化精確定量分析。江蘇bisulfite甲基化重測序分析

DNA甲基化是在DNA甲基化轉移(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5'端的胞嘧啶轉變為5'甲基胞嘧啶。蘇州bisulfite甲基化重測序哪里好

WGBS能為基因組DNA甲基化時空特異性修飾的研究提供重要技術支持,能廣泛應用在個體發育、衰老和疾病等生命過程的機制研究中,也是各物種甲基化圖譜研究的優先方法。常規全基因組甲基化測序技術通過T4-DNA連接酶,在超聲波打斷基因組DNA段的兩端連接接頭序列,連接產物通過重亞硫酸鹽處理將未甲基化修飾的胞嘧啶C轉變為尿嘧啶U,進而通過接頭序列介導的 PCR 技術將尿嘧啶U轉變為胸腺嘧啶T。上海翼和是上海市遺傳學會理事單位,上海市****,至今已有十六年的歷史。蘇州bisulfite甲基化重測序哪里好

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