DNA甲基化是一種重要的表觀遺傳學標記，在調控基因表達、細胞的分化與發育等過程中發揮著關鍵作用。使用基于重亞硫酸氫鹽測序的方法進行DNA甲基化評估：首先用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA可將未甲基化胞嘧啶轉化為尿嘧啶（黃色字母），而甲基化胞嘧啶保留為胞嘧啶（白色字母）；然后進行兩輪PCR：first輪PCR分別放大每個樣本的每個區域，并添加8個隨機核苷酸（N8）用于重復數據消除和適配體序列；在匯集每個生物樣本的擴增子后，第二輪PCR完成帶有樣本barcode的序列庫，用于多樣本NGS測序。Hi-Methylseq方案一次測序反應每個位點測序上百次節約時間、成本、定量準確。上海目標區間甲基化重測序準確度高

5甲基胞嘧啶 (5-methylcytosine, 5mC) 是一種常見的DNA修飾類型，能調節基因表達、轉座子及染色體的狀態等。全基因組重亞硫酸鹽轉化的WGBS法，能夠實現單堿基分辨率的甲基化位點準確、高效定位。通過***分析不同處理方式下的全基因組甲基化水平，快速準確鑒定出差異甲基化區域，有助于我們更加***深入地了解動、植物的甲基化模式和表觀調控機制，在動物行為、植物脅迫、植物性狀、胚胎發育、cancer疾病、生物標記物等方面具有普遍的應用。上海全基因組甲基化重測序機構DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非編碼區，DNA高度甲基化首先會影響DNA結構,引起基因沉默。

DNA甲基化過程在一些生物學現象中起重要作用。例如，在原核生物中，它參與毒力、細胞周期調控、基因表達和對外源 DNA 導入的保護（DNA-宿主特異性）等過程。在高等真核生物中，DNA 甲基化參與調控染色體穩定性、印記、X 染色體失活和cancer 變等多個細胞過程。在哺乳動物中，DNA 甲基化主要發生在胞嘧啶堿基的第五個碳原子上，形成 5-甲基胞嘧啶或 5-甲基胞嘧啶核苷 (5-mC)。DNA甲基化幾乎只存在于CpG二核苷酸上，是一個關鍵的表觀遺傳標記和基因表達調控因子。基因啟動子或 CpG 島處的甲基化 CpG 簇與基因失活有關。DNA 甲基化由一個被稱為 DNA 甲基轉移酶并包括 DNMT1、DNMT3a 和 DNMT3b 的酶家族催化。DNMT3a 和 DNMT3b是從頭合成的甲基轉移酶，能夠甲基化之前未甲基化的 CpG二核苷酸。相反，DNMT1是一種維持性甲基轉移酶，在復制過程中修飾半甲基化的 DNA。

WGBS（Whole Genome Bisulfite Sequence）全基因組甲基化測序，利用重亞硫酸氫鹽使DNA中未發生甲基化的胞嘧啶(C)脫氨基轉變成尿嘧啶(U)，而甲基化的胞嘧啶保持不變，然后通過PCR將U變為A，*有甲基化的C可以成功保留，***通過測序就可判斷CpG位點是否發生甲基化。特點是精確度高、重復性好，檢測范圍廣，可以覆蓋全基因組范圍內的每一個C堿基的甲基化狀態；但需要的數據量比較大，成本較高。上海翼和生物是上海市遺傳學會理事單位，上海市****，至今已有16年的歷史。亞硫酸氫鹽處理可以使DNA中未發生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變。

DNA甲基化是研究 為普遍的表觀遺傳修飾，它被認為在許多生物學過程和疾病中有著重要的作用。隨著測序技術的快速發展，二代測序與重亞硫酸鹽處理基因組DNA相結合產生了可以在全基因組單堿基水平上測量DNA甲基化水平的全基因組重亞硫酸鹽測序（whole-genome bisulfite sequencing，WGBS）技術。WGBS的流程與全基因組DNA測序主要區別于DNA文庫的構建。以MethlyC-seq為例，將DNA 段化后收集特定長度的片段并修復DNA末端，再將雙端加上3′-dAMP然后連接上甲基化的接頭，接著用重亞硫酸鹽處理DNA使未甲基化的胞嘧啶（C）轉化為尿嘧啶（U）， 終進行低循環數的PCR擴增后完成建庫，建庫完后上機測序，得到原始數據（fastq文件）后，完成一定的質量控制后就可以進行mapping分析。重亞硫酸氫鈉測序法（Bisulfite sequencing，BS-Seq）被認為是5mC鑒定的金標準。廣州目標區間甲基化重測序哪里做

DNA甲基化通常抑制基因表達，去甲基化則誘導了基因的重新活化和表達。上海目標區間甲基化重測序準確度高

全基因組甲基化測序結合了亞硫酸氫鹽轉化（bisulfiteconversion）方法與新一代高通量測序技術，可在單堿基分辨率水平上高效地檢測全基因組DNA甲基化狀態。亞硫酸氫鹽處理可以使DNA中未發生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變，PCR擴增所需片段，則尿嘧啶全部轉化成胸腺嘧啶。對PCR產物進行高通量測序，與參考序列比對，即可判斷CpG/CHG/CHH位點是否發生甲基化。上海翼和生物是上海市遺傳學會理事單位，上海市****，至今已有16年的歷史。上海目標區間甲基化重測序準確度高

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