WGBS（Whole Genome Bisulfite Sequence）全基因組甲基化測序，利用重亞硫酸氫鹽使DNA中未發生甲基化的胞嘧啶(C)脫氨基轉變成尿嘧啶(U)，而甲基化的胞嘧啶保持不變，然后通過PCR將U變為A，*有甲基化的C可以成功保留，***通過測序就可判斷CpG位點是否發生甲基化。特點是精確度高、重復性好，檢測范圍廣，可以覆蓋全基因組范圍內的每一個C堿基的甲基化狀態；但需要的數據量比較大，成本較高。上海翼和生物是上海市遺傳學會理事單位，上海市****，至今已有16年的歷史。DNA復制后胞嘧啶的甲基化會改變DNA的構象，使DNA的大溝無法與DNA結合蛋白正常結合。北京目標位點甲基化重測序報告

DNA甲基化一直以來都是表觀遺傳學領域研究的重點之一。DNA甲基化（Methylation）是指在DNA甲基轉移酶（DNA methyltransferase, 縮寫DNMT）的作用下，基因組DNA序列上CpG島的二核苷酸5′端胞嘧啶轉變為5′甲基胞嘧啶（5′ methylcytosine, 縮寫5mC）。這種DNA修飾的方式并未改變基因的序列, 但能抑制某些基因的表達。在哺乳動物中，基因組DNA的甲基化可分為兩種類型：維持甲基化（maintenance DNA methylation）和重新甲基化（de novo methylation）。維持甲基化是指在甲基轉移酶的作用下，DNA的半保留復制過程中，會在子鏈的相應的位置進行甲基化修飾的過程。重新甲基化是指在甲基轉移酶的作用下，原來沒有甲基化的DNA雙鏈上，進行甲基化的過程，之后由維持甲基化酶來維持穩定的DNA甲基化狀態。對于這兩種甲基化機制來說，有兩種對應類型的甲基化酶：維持甲基轉移酶和重新甲基轉移酶。河南目標區段甲基化重測序怎么解決上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽處理，用PCR擴增目的片段，并結合二代測序平臺并對PCR產物進行測序。

DNA甲基化即在DNA上增加甲基基團，是使基因的轉錄抑制或沉默的主要方式。該修飾特異性地發生在CpG位點，胞嘧啶通過磷酸鹽與鳥苷酸連接(圖1)。甲基基團的插入改變了DNA的表觀和結構，可能會直接阻礙DNA的識別及與轉錄因子的結合，或者吸引其他因子優先與DNA結合，干擾轉錄因子的結合。目前已鑒定了三個與甲基化DNA結合的蛋白家族，包括MBD蛋白、Kaiso和Kaiso樣蛋白、以及SRA蛋白。通過招募這些蛋白，DNA甲基化可促進某些組蛋白狀態的維持，如去乙酰作用，從而保持轉錄后的組蛋白修飾。例如，MBD家族的甲基CpG結合蛋白2(MeCP2)與甲基CpG結合，招募HDACs，可促使染色體濃縮和轉錄抑制。

DNA甲基化是表觀遺傳學修飾的主要形式，甲基化模式的異常促進細胞惡性轉化，參與tumour演進。許多基因具有tumour特異性的甲基化表型，一方面基因組普遍的低甲基化引起原cancer基因活化，基因組不穩定性增加；另一方面啟動子區的高甲基化，引起抑cancer基因及錯配修復基因表達沉默，導致tumour的發生。研究表明，基因組的低甲基化隨著細胞惡性度的增加而愈加明顯，是病情診斷的重要指標；此外，CpG島局部的高甲基化發生于細胞惡變之前，能在早期預測tumour的發生，其也能有效地預測tumour的復發和轉移，在tumour的鑒別診斷中亦發揮重要作用。因此，檢測tumour發生中相關基因的甲基化模式具有重要意義，現就近年來中外文獻報道的甲基化檢測方法進行簡要的分析總結。機體細胞在經歷脅迫、創傷等環境變化后，會產生特定的應答，并往往會用DNA甲基化記錄在DNA修飾中。

目標區域甲基化重測序（Hi-MethylSeq），又叫重亞硫酸鹽擴增子測序（Bisulfite Amplicon Sequencing， BSAS）。在前期全基因組甲基化測序、全基因組甲基化芯片等工作基礎上，或者依據文獻報道目的基因甲基化與性狀/疾病關聯，選擇感興趣的目的區間或候選基因，利用Hi-MethylSeq技術對大規模群體的候選基因甲基化水平進行檢測。Hi-MethylSeq技術通過亞硫酸氫鹽（bisulfite）處理，用多重PCR擴增目的片段，添加barcode和測序通用接頭，在Illumina X10二代測序平臺對PCR產物進行高通量測序，利用生物信息學方法，精確定量計算目標區間內的甲基化位點的甲基化狀態，在完成目標區域檢測的同時大幅降低研究費用。DNA 甲基化能關閉某些基因的活性，去甲基化則誘導了基因的重新活化和表達。河南目標區段甲基化重測序怎么解決

異常的DNA甲基化可參與調控疾病相關的分子信號通路,從而影響其正常功能。北京目標位點甲基化重測序報告

真核生物基因表達受多種機制、多層面的綜合調控。基因的DNA序列不發生改變的情況下，基因的表達水平與功能發生改變，并可遺傳現象，稱為表觀遺傳(epigenetic)現象。DNA甲基化是指在甲基轉移酶的催化下，DNA的CG二核苷酸中的胞嘧啶被選擇性的添加甲基，形成5-甲基胞嘧啶，常見于基因的5′—CG—3′序列。DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非編碼區，DNA高度甲基化首先會影響DNA結構，進而阻遏基因轉錄，引起基因沉默。人體內，DNA甲基轉移酶主要有四種：DNMT1、DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L。在DNA復制完成后，DNMT1是催化甲基轉移至新合成的DNA鏈上，這一現象稱為維持甲基化；DNMT3A和DNMT3B負責催化核酸鏈上新的甲基化位點發生反應，成為形成甲基化；DNMT3L不具有甲級轉移酶活性，其主要作用是調節其他甲基轉移酶的活性。真核細胞內甲基化狀態有3種：持續的低甲基化狀態（如持家基因的甲基化）、誘導的去甲基化狀態（如一些發育階段特異性基因的修飾）和高度甲基化狀態（如人類女性細胞內縊縮-失活的X染色體的甲基化）。北京目標位點甲基化重測序報告

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