免疫組化。染色 免疫組化可以輔助病理診斷、指導診斷、評估預后,所以在做免疫組化過程中的質控問題處理尤其重要[1]。隨著免疫組化試劑新種類不斷出現及方法的改進,特別是即用型試劑盒的出現,使抗體的標記更加簡便、快捷,更加規范化。免疫組化標準化染色技術是一項實驗性很強的技術,任何一個環節出現......免疫組化可以輔助病理診斷、指導診斷、評估預后,所以在做免疫組化過程中的質控問題處理尤其重要,隨著免疫組化試劑新種類不斷出現及方法的改進,特別是即用型試劑盒的出現,使抗體的標記更加簡便、快捷,更加規范化。免疫組化標準化染色技術是一項實驗性很強的技術,任何一個環節出現問題,都可以直接影響免疫組化結果。免疫...
—20℃)凍存——應選較佳稀度凍存。③若工作濃度大于1∶500則要先將原液稀釋十倍,而后分裝10μl/瓶→凍存(-20℃)于冰箱備用。④關于Ab保存應參照說明書。(3)Ab濃度的選擇Ab濃度不可太高或太低,因為Ag-Ab結合需在一定濃度范圍內進行,若一方過剩則形成復合物小且少;極過剩時已形成的復合物亦會解體而呈現假陰性。——并非Ab濃度越高越好。3.Ab滴片技術——所滴的抗體應與切片上的組織剛好吻合。[注意]滴抗體前需把切片上的水弄干,但不能干片。要領:甩凈組織周圍的水。4.PBS洗滌技術(1)洗滌的目的①保證離子濃度和PH值。②減少非特異反應(平時Ab不可靠很純)(2)方法:洗三次,...
是否有效的祛除了內源性酶和生物素 應注意的是,并不是每一種組織均需要祛除內源性酶和生物素,但對于內源性酶和生物素含量豐富的組織如肝臟、腎臟等,如染色效果不佳,均考慮此原因。處理方法為:(1)滅活堿性磷酸酶:常用的方法是將左旋咪唑(24mg/ml)加入底物液中,并保持pH值在7.6~8.2之間,即能祛除大部分內源性堿性磷酸酶,對于仍能干擾染色的酸性磷酸酶,可用50mmol/L的酒石酸;(2)飽和處理內源性生物素:消除內源性生物素的方法是事先滴加親和素以飽和內源性生物素,使之不再有剩余的結合位點,具體操病理實驗免疫組化專業設備,真實實驗結果。北京免疫組化服務 織材料的處理 組織...
5.滴加抗體,4℃過液或室溫5′~1hour。6.,洗三次,每次5分鐘。7.滴加第二抗體,室溫15′~60′。8.洗凈,洗三次,每次5分鐘。9.滴加ABC復合物,室溫15~60分鐘。10.洗三次,每次5分鐘。11.Tris–HCL5~10分鐘,此步可省略。12.DAB—H2O2顯色:用,室溫5~30分鐘,隨時鏡檢(DAB用時新配)13.自來水洗凈。14.用Mayer蘇木素或甲基綠,復染胞核(可不染)。15.常規脫水、透明、封固、鏡檢。結果:棕褐色反應產物**抗原X的定位。免疫組化染色基本技術及注意事項1.實驗計劃①根據課題的內容選用動物,選用配套的Ab。如Ab—I鼠抗人的抗體,與其他種...
如肽類、神經遞質、細胞因子、受體、表面抗原等等均可用免疫組織化學方法顯示,因而目前在基礎與臨床科研中被廣泛應用。較近幾年,分子生物學研究異常活躍,但較終還要歸到形態上來。用免疫組織化學方法對所研究的大分子分子進行定位,進而深入研究其功能。免疫組化技術免疫組織化學編輯染色方法1.直接法熒光素直接標記特異性抗體(—抗)上,標記抗體與抗原結合(在切片上)熒光顯微鏡下觀察→檢測抗原。△酶標抗體要顯示后鏡檢。直接法優點:簡單,時間短,特異性強。缺點:靈敏度低,所需抗體量大(不經濟)。應用:基本不用!2.間接法熒光素標記在二抗上(二抗:抗產生一抗動物的IgG抗體)。※顯色后鏡檢特點:較直接法靈敏,...
好壞有著密切的聯系。由于各種抗原的生化、物理性質不同,如溫度高低、酸堿度強弱及各種化學試劑的作用均可影響抗原的免疫學活性,良好的細胞和組織學結構將有助于抗原的準確定位。因此,細胞和組織標本的采集制備在免疫組織化學技術中占有十分重要的位置。(一)細胞標本的取材目前,免疫組化技術已經應用于細胞學診斷,如鑒別低分化*與惡性淋巴瘤、黑色素瘤、低分化肉瘤等。CEA應用于胸腹水中間皮瘤與*的鑒別,熱修復法 現常用微波修復、高溫高壓修復、水浴加熱修復法。較常用的修復法是pH6.0枸櫞酸緩沖液。修復過程中的注意要點是:(1)達到規定的溫度(92℃~95℃以上);(2)維持一定的時間,微波修復、水浴加熱須控制在...
免疫組織化學(Immunohistochemistry)又稱 免疫細胞化學。它是 組織化學的分支,它是用標記的 特異性抗體(或抗原)對組織內抗原(或抗體)的分布進行組織和細胞原位檢測技術。 中文名 免疫組化技術 外文名 Immunohistochemistry 又 稱 免疫細胞化學 屬 于 組織化學 目錄 1 前言 ? 發展介紹 ? 技術分類 ? 標記物 ? 應用 2 免疫組織化學 免疫組化技術前言 編輯 免疫組化技術發展介紹 ——1941年 Coons 首先用 熒光素 標記抗體—檢測肺組織內的肺炎雙球菌獲得成功。 —— 60年代 Nakane建立酶標抗體技術——鐵蛋白標記A...
免疫組織化學(Immunohistochemistry)又稱 免疫細胞化學。它是 組織化學的分支,它是用標記的 特異性抗體(或抗原)對組織內抗原(或抗體)的分布進行組織和細胞原位檢測技術。 中文名 免疫組化技術 外文名 Immunohistochemistry 又 稱 免疫細胞化學 屬 于 組織化學 目錄 1 前言 ? 發展介紹 ? 技術分類 ? 標記物 ? 應用 2 免疫組織化學 免疫組化技術前言 編輯 免疫組化技術發展介紹 ——1941年 Coons 首先用 熒光素 標記抗體—檢測肺組織內的肺炎雙球菌獲得成功。 —— 60年代 Nakane建立酶標抗體技術——鐵蛋白標記A...
非特異性染色彌散性均勻)2.組織切片制作過程的影響①固定不良—非特異性染色,顯示不均。②邊緣干燥—非特異性染色(常見),加抗體時勿干片。3.人工假象與特異性結果顯示不在同一平面上。陽性對照:用已知抗原陽性的切片與待檢標本同時進行免疫細胞化學染色。對照切片呈陽性結果,標為陽性對照。陰性對照:用確證不含已知抗原的標本作對照,應呈陰性結果,稱陰性對照。其實這只是陰性對照中的一種,陰性對照還應包括空白、替代、吸收和***實驗。▲染色失敗的幾種原因:(1)所染的全部切片均為陰性結果,包括陽性對照在內。全部(-)原因可能:①染色未完全嚴格按照操作步驟進行;②漏加一種抗體,或抗體失效;③緩沖液內含疊...
DAB顯色 背景的深淺和特異性染色的深淺均可以由DAB孵育條件決定。DAB顯色時間不是固定的,主要由顯微鏡下控制顯色時間,到出現特異性染色較強而本底著色較淺時即可沖洗;DAB顯色時間很短(如幾秒或幾十秒)就出現很深的棕褐色,這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時間過長,需要下調抗體濃度或縮短你的抗體孵育時間;此外,若很短時間就出現背景很深,還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全,需要延長封閉時間;DAB顯色時間很長(如超過十幾分鐘)才出現陽性染色,一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時間過短(比較好一抗4℃過夜);另一方面就是封閉時間過長。 專業從事免疫實驗的整體方案。黑龍江...
免疫組化可以輔助病理診斷、指導、評估預后,所以在做免疫組化過程中的質控問題處理尤其重要。免疫組化技術是利用已知的特異性抗體或抗原特異性結合的特點,通過化學反應使標記于結合后的特異性抗體上的顯示劑通過借助顯微鏡的觀察,從而在抗原抗體結合部位確定組織細胞結構的一門組化技術。在病理診斷、基礎醫學研究工作中免疫組化技術已成為非常重要的手段。隨著免疫組化試劑新種類不斷出現及方法的改進,特別是即用型試劑盒的出現,使抗體的標記更加簡便、快捷,更加規范化,標準化的實驗操作是必不可少的。免疫組化標準化染色技術是一項實驗性很強的技術,任何一個環節出現問題,都可以直接影響免疫組化結果免疫組化切片 不掉片,厚薄均勻哪...
這些常用免疫組織化學方法的原理如下: 1. 免疫熒光細胞化學技術 將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當抗原抗體復合物中的熒光素受激發光的照射后會發出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量. 2. 免疫酶細胞化學技術 是免疫組織化學研究中較好常用的技術.基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對細胞或組織內的相應抗原進行定位或定性研究. 3. 免疫膠體金技術 就是用膠體金標記一抗,二抗或其他的能特異性的結合免疫球蛋...
石蠟切片厚4~6μm,撈片于多聚賴氨酸防脫水劑中,60℃烘烤30min~60min,再脫蠟、脫水。這個處理過程的關鍵是要保證梯度二甲苯和酒精的濃度,使組織脫蠟、脫水干凈徹底,否則,水洗后切片含有“油珠”,呈云霧狀,沖洗不干凈,致使抗體在組織上分布不均,導致染色效果不佳。我科的方法是:普通常規染色所用的梯度二甲苯和酒精與免疫組織化學染色所用的梯度二甲苯和酒精分開,并且定期更換液體。在二甲苯脫蠟時,二甲苯I和II脫蠟時間不少于半小時,梯度酒精各5min左右。如在室溫較低時,應將梯度二甲苯放于恒溫箱中提前預熱,梯度酒精時間延長,保證組織的充分脫蠟脫水。病理實驗 免疫熒光,HE染色服務實驗找融享生物。...
染色免疫組化可以輔助病理診斷、指導、評估預后,所以在做免疫組化過程中的質控問題處理尤其重要[1]。隨著免疫組化試劑新種類不斷出現及方法的改進,特別是即用型試劑盒的出現,使抗體的標記更加簡便、快捷,更加規范化。免疫組化標準化染色技術是一項實驗性很強的技術,任何一個環節出現問題,都可以直接影響免疫組化結果, 【摘要】目的研究CEA免疫組化染色在檢測系膜微轉移及環周切緣(CRM)侵犯方面的價值。方法選取經纖維結腸鏡及病理證實為直腸*病人40例,應用大組織切片技術對術后標本處理,分別行常規染色及CEA免疫組化染色,比較分析兩種染色方法在檢測系膜微轉移及CRM侵犯方面的價值。結果CEA染色檢測...
意義編輯 近年來,隨著免疫組織化學技術的發展和各種特異性抗體的出現,使許多疑難得到了明確診斷。在常規病理診斷中,5%-10%的病例單靠H.E.染色難以作出明確的形態學診斷。尤其是免疫組化在診斷和鑒別診斷中的實用價值受到了普遍的認可,其在低分化或未分化的鑒別診斷時,準確率可達50%-75%。免疫組織化學的臨床應用主要包括以下幾方面: ⑴惡性的診斷與鑒別診斷; ⑵確定轉移性惡性的原發部位; ⑶對某類進行進一步的病理分型; ⑷軟組織的一般需根據正確的組織學分類,因其種類多、組織形態相像,有時難以區分其組織來源,應用多種標志進行免疫...
常用染色方法 根據標記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標法,親和組織化學法,后者是以一種物質對某種組織成分具有高度親合力為基礎的檢測方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法較好常用。判定分析編輯 免疫組化染色(IHC) 免疫組化染色(IHC) 從實驗結果而言,免疫組化技術服務主要涉及抗體實驗結果的描述與分析,圖片的確定與選取,相關數據的提供,上述工作是免疫組化工作的重點內容,只有嚴格的實驗設計,標準的實驗操作,專業化的結果分析才能更好的滿足客戶的要求,這點對于形式為腹水,上清,培養液之類的抗體顯得更為重要。關...
分類 1)按標記物質的種類,如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等,可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標法和免疫金銀法等。 2)按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法)。與直接法相比,間接法的靈敏度提高了許多。 3)按結合方式可分為抗原-抗體結合,如過氧化物酶-抗過氧化物酶(***)法;親和連接,如卵白素-生物素-過氧化物酶復合物(ABC)法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(SP)法等,其中SP法是比較常用的方法;聚合物鏈接,如即用型二步法,此方法尤其適合于內源性生物素含量高的組織抗原檢測。 ...
芯片與常規切片免疫組化標記的比較 常規制片免疫組化陰性,而組織芯片免疫組化陽性者包括ER2例,PR1例;常規制片免疫組化陽性,而組織芯片免疫組化陰性者包括nm23、Her-2各1例。而部分病例常規制片免疫組化和組織芯片免疫組化陽性表達強度略有不同。組織芯片的免疫組化結果與常規制片免疫組化比較,統計學處理差異無顯現性。3.3 規格組織芯片免疫組化效果的比較 在本觀察中,使用1.0mm大小的組織芯進行免疫組化染色所得的結果和使用0.5mm組織芯所得結果一致,表明組織芯大小并不影響實驗結果,關鍵是在組織芯片制作過程中認真觀察原始常規切片,選取表示性區域并準確標記,在受體蠟塊相應位置采取組織芯塊。在同...
封片 為了長期保存,我們一般用中性樹膠等封片,避免產生氣泡,方法是直接在載玻片組織上滴一滴封片液,然后一手拿住蓋片某一拐角,而另一手拿對面的那個拐角,接近封片液近端的拐角先降低,直至接觸到液體時為止;當發現液體接觸面在不斷彌散時,則可以緩慢降低另一拐角,這樣一般不會產生氣泡。免疫熒光方法中的重要環節 1)冰凍切片制備 建議用新鮮組織,否則組織細胞內部結構破壞,易使抗原彌散。選用干凈鋒利的刀片、組織一定要冷凍適度等,防止裂片和脫片嚴重。 有關免疫組化,HE染色,免疫熒光服務就找融享生物。江西IHC免疫組化公司哪里有眾所周知,冰凍切片較突出的優點就是能夠較完好地保存抗...
免疫膠體金技術 免疫膠體金技術是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物。膠體金是指金的水溶膠,它能迅速而穩定地吸附蛋白,對蛋白的生物學活性則沒有明顯的影響。因此,用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針,就能對組織或細胞內的抗原進行定性、定位,甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒,且膠體金的電子密度高,所以免疫膠體金技術特別適合于免疫電鏡的單標記或多標記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色,因此也適合進行光鏡觀察。如應用銀加強的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。 上海融享生物免疫組化 收費標準,可以提供有效保障。黑龍江熒光免疫組化...
免疫組織化學(Immunohisochemistry)檢測技術曾被公認為病理學發展史上的第二個里程碑,此項技術發展到現在,較好充實了病理學的內容,使病理診斷結果更精確,將病理學提高到了形態和功能相結合的水平。免疫組織化學方法的敏感性和特異性直接影響診斷結果的準確性。近兩年來,在本科同志的配合下,筆者已做免疫組化420例,取得了很好的效果,并且明顯的提高了診斷結果的準確性,支持了對臨床病人的診療。現提出以下五點供同道借鑒上海融享生物科技有限公司整體實驗外包免疫組化等病理實驗。遼寧動物實驗免疫組化檢測冰凍切片是借助低溫冷凍將活檢組織快速凍結達到一定的硬度進行制片的一種方法,手術中等待冰凍快速病理報...
免疫組化。染色 免疫組化可以輔助病理診斷、指導診斷、評估預后,所以在做免疫組化過程中的質控問題處理尤其重要[1]。隨著免疫組化試劑新種類不斷出現及方法的改進,特別是即用型試劑盒的出現,使抗體的標記更加簡便、快捷,更加規范化。免疫組化標準化染色技術是一項實驗性很強的技術,任何一個環節出現......免疫組化可以輔助病理診斷、指導診斷、評估預后,所以在做免疫組化過程中的質控問題處理尤其重要,隨著免疫組化試劑新種類不斷出現及方法的改進,特別是即用型試劑盒的出現,使抗體的標記更加簡便、快捷,更加規范化。免疫組化標準化染色技術是一項實驗性很強的技術,任何一個環節出現問題,都可以直接影響免疫組化結果。快速...
—20℃)凍存——應選較佳稀度凍存。③若工作濃度大于1∶500則要先將原液稀釋十倍,而后分裝10μl/瓶→凍存(-20℃)于冰箱備用。④關于Ab保存應參照說明書。(3)Ab濃度的選擇Ab濃度不可太高或太低,因為Ag-Ab結合需在一定濃度范圍內進行,若一方過剩則形成復合物小且少;極過剩時已形成的復合物亦會解體而呈現假陰性。——并非Ab濃度越高越好。3.Ab滴片技術——所滴的抗體應與切片上的組織剛好吻合。[注意]滴抗體前需把切片上的水弄干,但不能干片。要領:甩凈組織周圍的水。4.PBS洗滌技術(1)洗滌的目的①保證離子濃度和PH值。②減少非特異反應(平時Ab不可靠很純)(2)方法:洗三次,...
免疫組織化學(Immunohistochemistry)又稱 免疫細胞化學。它是 組織化學的分支,它是用標記的 特異性抗體(或抗原)對組織內抗原(或抗體)的分布進行組織和細胞原位檢測技術。 中文名 免疫組化技術 外文名 Immunohistochemistry 又 稱 免疫細胞化學 屬 于 組織化學 目錄 1 前言 ? 發展介紹 ? 技術分類 ? 標記物 ? 應用 2 免疫組織化學 免疫組化技術前言 編輯 免疫組化技術發展介紹 ——1941年 Coons 首先用 熒光素 標記抗體—檢測肺組織內的肺炎雙球菌獲得成功。 —— 60年代 Nakane建立酶標抗體技術——鐵蛋白標記A...
固定若想得到理想的ICC染色結果、正確地判斷抗原物質在組織細胞內的位置,除需有良好酶和抗體外,保持組織細胞內抗原物質的不動性(Immobility)和免疫活性也是至關重要的。換言之,如果抗原物質在組織細胞間彌散、丟失或失去免疫活性,無論如何努力染色都是徒勞的,所以說固定是ICC染色中非常重要的一環。ICC與其它組織學技術不同,除要求保存良好的結構外,還需保存組織抗原的免疫活性。一般認為,新鮮組織能夠比較大限度地保存組織抗原的免疫活性,但結構較差,易出現抗原彌散丟失現象。Cumming(1980)報告,不固定的組織切片ICC染色時,環鳥苷酸含量丟失80%以上免疫組化博士團隊專門為您打造屬于您的服...
陰性染色產生的原因有: ⑴一抗和二抗濃度不合適或孵育條件不妥。 ⑵熒光素提前衰退。熒光素質量不佳或操作過程中沒有注意避光等防止熒光素衰退的事項。 ⑶血清封閉時間過長。 ⑷抗體稀釋液PH值不合適,影響抗原抗體反應。 ⑸組織切片不平、裂片或脫片很嚴重,易引起大塊陰性著色。 ⑹組織標本不新鮮或已經冷凍組織制成的切片中抗原易彌散,易引起本來表達的部位陰性染色或弱著色。 ⑺熒光顯微鏡不會使用,激發波長選擇錯誤。 免疫組化,是應用免疫學基本原理--抗原抗體反應,即抗原與抗體特異性結合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯...
免疫組織化學(Immunohisochemistry)檢測技術曾被公認為病理學發展史上的第二個里程碑,此項技術發展到現在,較好充實了病理學的內容,使病理診斷結果更精確,將病理學提高到了形態和功能相結合的水平。免疫組織化學方法的敏感性和特異性直接影響診斷結果的準確性。近兩年來,在本科同志的配合下,筆者已做免疫組化420例,取得了很好的效果,并且明顯的提高了診斷結果的準確性,支持了對臨床病人的診療。現提出以下五點供同道借鑒融享生物專注于病理實驗 免疫熒光,HE染色服務實驗如果你有需要可以找融享生物。山東免疫學免疫組化檢測 免疫膠體金技術 免疫膠體金技術是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標...
減少或消除非特異性染色的方法 組織中非抗原抗體反應出現的陽性染色稱為非特異性背景染色,較好常見的原因是蛋白吸附于高電荷的膠元和結締組織成分上。有效方法是在用首先抗體前加制備第二抗體動物之非免疫血清(1:5-1:20)封閉組織上帶電荷基團而除去與首先抗體非特異性結合。必要時可加入2%-5%牛血清白蛋白,可進一步減少非特異性染色。作用時間為10-20min。也可用除制備首先抗體以外的其它動物血清(非免疫的)。有明顯溶血的血清不能用,以免產生非特異性染色。免疫熒光染色時,可用0.01%伊文氏蘭(PBS溶液)稀釋熒光抗體,對消除背景的非特異性熒光染色有很好的效果。當然使用特異性高、效價高的首先抗體是...
酶消化法 常用的消化酶有胰蛋白酶、胃蛋白酶,應嚴格掌握好消化時間、溫度和濃度。胰蛋白酶使用濃度為0.05%~0.1%,消化溫度為37℃,消化時間為10~40**要用于細胞內抗原的顯示:胃蛋白酶使用濃度為0.4%,消化溫度為37℃,消化時間為30~180要用于細胞間質抗原的顯示,如:Laminin(層粘蛋白),Collagen IV(IV型膠原蛋白)等。熱修復法 現常用微波修復、高溫高壓修復、水浴加熱修復法。較常用的修復法是pH6.0枸櫞酸緩沖液。修復過程中的注意要點是:(1)達到規定的溫度(92℃~95℃以上);(2)維持一定的時間,微波修復、水浴加熱須控制在10~15min,高溫高壓修復須控...
免疫膠體金技術 免疫膠體金技術是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物。膠體金是指金的水溶膠,它能迅速而穩定地吸附蛋白,對蛋白的生物學活性則沒有明顯的影響。因此,用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針,就能對組織或細胞內的抗原進行定性、定位,甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒,且膠體金的電子密度高,所以免疫膠體金技術特別適合于免疫電鏡的單標記或多標記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色,因此也適合進行光鏡觀察。如應用銀加強的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。 免疫組化哪里好就找融享生物。河北特殊染色免疫組化機構電話 意...