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連接酶檢測(cè)反應(yīng)(LigaseDetectionReaction，LDR)是利用高溫連接酶實(shí)現(xiàn)對(duì)基因多態(tài)性位點(diǎn)的識(shí)別，高溫連接酶一旦檢測(cè)到DNA與互補(bǔ)的兩條寡聚核苷酸接頭對(duì)應(yīng)處存在著基因點(diǎn)突變類型的堿基錯(cuò)配，連接反應(yīng)就不能進(jìn)行。該方法，對(duì)SNP位點(diǎn)同時(shí)設(shè)計(jì)兩條有...

二代測(cè)序法主要通過(guò)PCR的方法，對(duì)目標(biāo)SNP位點(diǎn)進(jìn)行特異性捕獲。為了提型的通量，目前多采用多重PCR的方法同時(shí)對(duì)多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行捕獲（可同時(shí)對(duì)1-100位點(diǎn)進(jìn)行分型）。由于二代測(cè)序通量是足夠滿足數(shù)百數(shù)千樣本的同時(shí)測(cè)序，因此需要對(duì)不同的樣本添加的樣本標(biāo)簽（Barco...

片段長(zhǎng)度多態(tài)性（限制性內(nèi)切酶）法——RFLP（RestrictionFragmentLengthPolymorphism）法的基本原理是通過(guò)PCR擴(kuò)增目的片段DNA，擴(kuò)增產(chǎn)物再用特異性內(nèi)切酶酶切成不同大小的片段，直接通過(guò)凝膠電泳分辨基因型。不同等位基因的限制性...

TaqMan熒光探針是一種寡核苷酸探針，熒光基團(tuán)連接在探針的5’末端，而淬滅劑則在3’末端。在PCR反應(yīng)體系中加入2種不同熒光標(biāo)記的探針，它們可以分別與2個(gè)等位基因完全配對(duì)。正常情況下，由于探針5’端熒光基團(tuán)和3’端淬滅基團(tuán)緊鄰在一起，熒光被淬滅。隨著PCR有...

序列相似性比較：將待研究序列與DNA或蛋白質(zhì)序列庫(kù)進(jìn)行比較，用于確定該序列的生物屬性，也就是找出與該序列相似的一致序列是什么。完成這一工作只需要使用兩兩序列比較算法。常用的程序包郵BLAST；FASTA等。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司是上海市遺傳學(xué)會(huì)理事單位，...

SNP挑選：（1）SNP位于非編碼區(qū)；（2）SNP平均分布在29條常染色體上；（3），小等位基因頻度（MAF）需大于30%，保證位點(diǎn)有足夠多態(tài)性；SNP鑒定方法~翼和Hi-SNP：59個(gè)SNP采用上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司的Hi-SNP技術(shù)，由本公司實(shí)施多重...

理論上講，SNP既可能是二等位多態(tài)性，也可能是3個(gè)或4個(gè)等位多態(tài)性，但實(shí)際上，后兩者非常少見(jiàn)，幾乎可以忽略。因此，通常所說(shuō)的SNP都是二等位多態(tài)性的。這種變異可能是轉(zhuǎn)換（C T，在其互補(bǔ)鏈上則為G A），也可能是顛換（C A，G T，C G，A T）。轉(zhuǎn)換的發(fā)...

上海翼和生物根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)規(guī)模，提供兩種檢測(cè)平臺(tái)，分別為：適合中低通量檢測(cè)的PCR-LDR分型服務(wù)和適合高通量的基于二代Hi-SNP分型服務(wù)。PCR-LDR SNP分型服務(wù)：PCR-LDR技術(shù)是PCR技術(shù)和LDR(Ligase Detection Reactio...

網(wǎng)絡(luò)版本的NCBI在內(nèi)的很多網(wǎng)站都提供了在線的blast服務(wù)，是**經(jīng)常用到的blast服務(wù)。網(wǎng)絡(luò)版本的NCBI優(yōu)點(diǎn)：方便，容易操作，數(shù)據(jù)庫(kù)同步更新等優(yōu)點(diǎn)。網(wǎng)絡(luò)版本的NCBI缺點(diǎn)：不利于操作大批量的數(shù)據(jù)，同時(shí)也不能定義搜索的數(shù)據(jù)庫(kù)。單機(jī)版本的NCBI 通過(guò)...

細(xì)胞STR鑒定——給你的細(xì)胞一個(gè)“明明白白的”身份，正如人類個(gè)體有指紋識(shí)別一樣，每種細(xì)胞系也有它獨(dú)特的“指紋”:STR。STR，全稱Short tandem repeat ,中文名“短串聯(lián)重復(fù)序列”，是一類普遍存在于真核生物基因組中的DNA串聯(lián)重復(fù)序列。由于不...

翼和送樣要求有以下幾點(diǎn)： 1.細(xì)胞上清：在無(wú)抗生su及其它抑菌或滅菌物質(zhì)條件下培養(yǎng)3天，取1.0ml 細(xì)胞培養(yǎng)上清液移至2ml離心管中，請(qǐng)加冰袋運(yùn)輸。2.細(xì)胞沉淀：在無(wú)抗生su及其它抑菌或滅菌物質(zhì)條件下培養(yǎng)3天，取1.0ml 細(xì)胞培養(yǎng)上清液移至2ml 離心管中...

翼和采用PCR 檢測(cè)法，含有化學(xué)修飾熱啟動(dòng)酶的 2×PCR mix，配以 dUTP 和UDG 酶，可很大程度降低非特異擴(kuò)增和引物二聚體的形成，有效防止 PCR 產(chǎn)物的交叉污染。對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)樣本內(nèi)支原體16S rRNA 基因高度保守區(qū)域特異性片段進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，與含...

LDR連接酶檢測(cè)法優(yōu)點(diǎn)是適用于任何多態(tài)性位點(diǎn)，基于雜交反應(yīng)和連接反應(yīng)，分型結(jié)果準(zhǔn)確，可進(jìn)行多重反應(yīng)，性價(jià)比較高，且實(shí)驗(yàn)靈活。但是相比TaqMan和直接測(cè)序法的單一位點(diǎn)檢測(cè)而言，LDR法可以實(shí)現(xiàn)多位點(diǎn)的同時(shí)檢測(cè)，提高檢測(cè)通量，因此前期需要一定時(shí)間構(gòu)建多重分型方案...

競(jìng)爭(zhēng)性等位基因特異性PCR法——KASP（KompetitiveAlleleSpecificPCR），是英國(guó)LGC（**化學(xué)家實(shí)驗(yàn)室）公司所開(kāi)發(fā)的技術(shù)，被比較常見(jiàn)用于少位點(diǎn)，多樣本的SNP分型中，與TaqMan熒光探針?lè)ㄓ幸欢ㄏ嗨菩?。KASP基于引物末端堿基的...

目前市場(chǎng)上有多個(gè)廠家提供HRM分析的儀器，包括IdahoTechnology、Corbett（QIAGEN）、Roche等，有些是HRM的儀器，有些則是附帶HRM功能的定量PCR儀。HRM的發(fā)明者—美國(guó)猶他大學(xué)醫(yī)學(xué)院的Wittwer實(shí)驗(yàn)室曾評(píng)估了市場(chǎng)上多臺(tái)儀器...

3、SNP等位基因頻率的容易估計(jì)。采用混和樣本估算等位基因的頻率是種高效快速的策略。該策略的原理是：首先選擇參考樣本制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將待測(cè)的混和樣本與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，根據(jù)所得信號(hào)的比例確定混和樣本中各種等位基因的頻率。4、易于基因分型。SNPs的二態(tài)性，也...

單核苷酸多態(tài)性（singlenucleotidepolymorphism，SNP），主要是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。它是人類可遺傳的變異中，常見(jiàn)的一種。占所有已知多態(tài)性的90%以上。SNP在人類基因組中比較常見(jiàn)存在，平均每50...

1.TaqMan探針?lè)ㄡ槍?duì)染色體上的不同SNP位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)PCR引物和TaqMan探針，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增。探針的5’-端和3’-端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。當(dāng)溶液中存在PCR產(chǎn)物時(shí)，該探針與模板退火，即產(chǎn)生了適合于核酸外切酶活性的底物，...

5.IlluminaBeadXpress法采用Illumina公司的BeadXpress系統(tǒng)進(jìn)行批量SNP位點(diǎn)檢測(cè)，可以同時(shí)檢測(cè)1-384個(gè)SNP位點(diǎn)，往往用于基因組芯片結(jié)果確認(rèn)，適合高通量檢測(cè)。微珠芯片具有高密度、高重復(fù)性、高靈敏度、低上樣量、定制靈活等特點(diǎn)...

SNP位點(diǎn)信息：人類基因組需SNP位點(diǎn)的rs號(hào)；其它物種如牛、雞、魚(yú)、水稻、玉米等無(wú)rs號(hào)的，需SNP位點(diǎn)上下游各250bp的確切序列、SNP位點(diǎn)突變類型、以及位點(diǎn)上下游25bp內(nèi)是否存在其它位點(diǎn)。（二代測(cè)序SNP基因分型）送樣注意事項(xiàng)：1.此分型方法適用于1...

3、SNP等位基因頻率的容易估計(jì)。采用混和樣本估算等位基因的頻率是種高效快速的策略。該策略的原理是：首先選擇參考樣本制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將待測(cè)的混和樣本與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，根據(jù)所得信號(hào)的比例確定混和樣本中各種等位基因的頻率。4、易于基因分型。SNPs的二態(tài)性，也...

目前市場(chǎng)上有多個(gè)廠家提供HRM分析的儀器，包括IdahoTechnology、Corbett（QIAGEN）、Roche等，有些是HRM的儀器，有些則是附帶HRM功能的定量PCR儀。HRM的發(fā)明者—美國(guó)猶他大學(xué)醫(yī)學(xué)院的Wittwer實(shí)驗(yàn)室曾評(píng)估了市場(chǎng)上多臺(tái)儀器...

單核苷酸多態(tài)性（SNP)主要應(yīng)用比較比較常見(jiàn)，主要場(chǎng)景：（1）科研：研究特定疾病發(fā)生的遺傳變異，如tumour、罕見(jiàn)變異。（2）臨床：用于tumour易感基因檢測(cè)、低頻tumour游離DNA檢測(cè)等。（3）健康：用于tumour風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，家族遺傳咨詢指導(dǎo)、生活方...

SNP（單核苷酸多態(tài)性）是遺傳學(xué)研究是不可缺少的一部分，上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司作為一家專門從事遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)的公司，SNP基因分型也是日常項(xiàng)目中經(jīng)常碰到的對(duì)象。但是目前成熟的SNP分型方法有很多，各有各的特點(diǎn)和適用性，這讓很多剛開(kāi)始接觸SNP分型的人們難...

3.HRM法高分辨率熔解曲線分析（HRM）是近幾年興起的SNP研究工具，它通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)升溫過(guò)程中雙鏈DNA熒光染料與PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的結(jié)合情況，來(lái)判斷是否存在SNP，而且不同SNP位點(diǎn)、是否是雜合子等都會(huì)影響熔解曲線的峰形，因此HRM分析能夠有效區(qū)分不同SNP位...

DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)的重要內(nèi)容。DNA甲基化是基因組DNA的一種主要表觀遺傳修飾形式。DNA甲基化修飾對(duì)于維持正常細(xì)胞功能、傳遞基因組遺傳印記、胚胎發(fā)育以及人類tumour發(fā)生，起著至關(guān)重要的作用。甲基化研究成為表觀遺傳學(xué)的熱點(diǎn)，相應(yīng)的技術(shù)也是層出不窮，根...

DNA甲基化主要形成5－甲基胞嘧啶（5-mC）和少量的N6-甲基嘌呤（N6-mA）及7－甲基鳥(niǎo)嘌呤（7-mG）。結(jié)構(gòu)基因含有很多CPG結(jié)構(gòu), 2CPG 和2GPC 中兩個(gè)胞嘧啶的5 位碳原子通常被甲基化, 且兩個(gè)甲基集團(tuán)在DNA 雙鏈大溝中呈特定三維結(jié)構(gòu)?；?..

DNA甲基化作為重要的表觀遺傳學(xué)調(diào)控機(jī)制在許多關(guān)鍵的生物學(xué)過(guò)程如發(fā)育及疾病的進(jìn)展中扮演著重要的作用，相對(duì)于基于PCR、芯片等傳統(tǒng)檢測(cè)手段，全基因組亞硫酸氫鹽測(cè)序(Whole Genome Bisulfite Sequencing, WGBS) 技術(shù)可通過(guò)將高效...

DNA甲基化主要形成5－甲基胞嘧啶（5-mC）和少量的N6-甲基嘌呤（N6-mA）及7－甲基鳥(niǎo)嘌呤（7-mG）結(jié)構(gòu)基因含有很多CpG 結(jié)構(gòu), 2CpG 和2GPC 中兩個(gè)胞嘧啶的5 位碳原子通常被甲基化, 且兩個(gè)甲基集團(tuán)在DNA 雙鏈大溝中呈特定三維結(jié)構(gòu)?；?..

DNA甲基化（DNA methylation）為DNA化學(xué)修飾的一種形式，能在不改變DNA序列的前提下，改變遺傳表觀。 DNA甲基化在維持細(xì)胞正常功能、傳遞基因組印記，胚胎發(fā)育、tumour發(fā)生等方面發(fā)揮重要作用，目前已經(jīng)成為表觀遺傳學(xué)和表觀基因組學(xué)的研究熱點(diǎn)...