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其中擴增dys19、dys388、dys389i、dys389ii、dys392、dys449、dys459a/b、dys485、dys504、dys531、dys626和dys627的引物不同。表52、取標準品2800m，用超純水稀釋，獲得濃度為1ng/μl的標準品2800m水溶液。3、以標準品2800m水溶液為模板，分別采用引物混合物1和引物混合物2進行pcr擴增，得到pcr擴增產物。每條引物在反應體系的濃度均為μm。4、同實施例2步驟一中3。5、同實施例2步驟一中4。6、同實施例2步驟一中5。檢測結果見表6。結果表明，實施例1制備的試劑盒中的引物被替換后，部分基因座被抑制且引物混...

二代測序是一個強大的功能平臺，它可以同時給數以萬計的DNA分子進行測序。由于這種可以多個樣本同時測序的能力，在個性化醫療、遺傳疾病和臨床診斷等方面，二代測序也就是高通量測序開創了**性的領域。早在1900年代就發明的Sanger測序法，成為了DNA測序的黃金法則，即便到了***它仍被***用來進行常規測序和NGS數據的驗證。它利用高保真DNA聚合酶生成與單鏈DNA模版互補的拷貝。在每個反應中，一個可以特異性識別模版的單鏈引物，可以從3端開始啟動DNA合成，根據堿基互補配對原則，脫氧核糖核苷酸或簡單的核苷酸是一個接一個的與模版配對。NGS平臺自身的軟件大多是做分析及報告的，樣本管理或...

既節約時間又降低測序成本。目前，基于法庭科學領域運用**多的ngs系統為illumina公司的miseqfgxtm系統和thermofisher公司的iontorrentpgmtm系統，但針對以上平臺的二代測序商業化str分型試劑盒的研發尚處于起步階段，主要有powerseqautosystem(promega，madison，wi,usa)、forenseqtmdnasignatureprepkit(illumina，sandiego，ca，usa)和precisionidglobalfilerngsstrkit(termofisher，waltham，ma，usa)。但以上試劑...

其中擴增dys19、dys388、dys389i、dys389ii、dys392、dys449、dys459a/b、dys485、dys504、dys531、dys626和dys627的引物不同。表52、取標準品2800m，用超純水稀釋，獲得濃度為1ng/μl的標準品2800m水溶液。3、以標準品2800m水溶液為模板，分別采用引物混合物1和引物混合物2進行pcr擴增，得到pcr擴增產物。每條引物在反應體系的濃度均為μm。4、同實施例2步驟一中3。5、同實施例2步驟一中4。6、同實施例2步驟一中5。檢測結果見表6。結果表明，實施例1制備的試劑盒中的引物被替換后，部分基因座被抑制且引物混...

1977年，WalterGilbert和FrederickSanger發明了***臺測序儀，并應用其測定了***個基因組序列，噬菌體X174，全長5375個堿基。由此開始，人類獲得了探索生命遺傳本質的能力，生命科學的研究進入了基因組學的時代，到至今為止的四十年時間內，測序技術已取得了相當大的發展，從***代發展到了第三代測序技術。Sanger所發明的測序方法被稱為***代測序技術，該技術直到現在依然被***使用，但是其一次只能獲得一條長度在700～1000個堿基的序列，無法滿足現代科學發展對生物基因序列獲取的迫切需求。高通量測序(High-ThroughputSequencing,...

本發明屬于法醫學技術領域，具體涉及基于二代測序技術檢測68個基因座的試劑盒及其使用的引物組合，尤其涉及基于二代測序技術檢測67個y-str基因座和amelogenin基因座的試劑盒及其使用的引物組合。背景技術：短串聯重復(shorttandemrepeat，str)是由2～6bp重復單位串聯組成且***存在于人類基因組中的一類具有長度多態性的dna序列，是目前法醫個體識別和親子鑒定應用*****的遺傳標記。人類y染色體短串聯重復(y-chromosomeshorttandemrepeats，y-str)具有父系遺傳、缺乏重組、分型簡單、信息量大、多態性高等特點，是研究人類的起源進化、民...

本發明屬于法醫學技術領域，具體涉及基于二代測序技術檢測68個基因座的試劑盒及其使用的引物組合，尤其涉及基于二代測序技術檢測67個y-str基因座和amelogenin基因座的試劑盒及其使用的引物組合。背景技術：短串聯重復(shorttandemrepeat，str)是由2～6bp重復單位串聯組成且***存在于人類基因組中的一類具有長度多態性的dna序列，是目前法醫個體識別和親子鑒定應用*****的遺傳標記。人類y染色體短串聯重復(y-chromosomeshorttandemrepeats，y-str)具有父系遺傳、缺乏重組、分型簡單、信息量大、多態性高等特點，是研究人類的起源進化、民...

測序成本的變化除了測序通量和讀長的進步之外，測序技術的大范圍應用**主要應該歸功于成本的下降，在早期只有***代測序技術之時，人類基因組計劃耗資30億美元才獲得了大部分的人類基因組信息，這樣高昂的成本顯然不是常規科學研究者能夠承受的?；驕y序技術成本變化新一代測序技術的發明和應用**降低了獲取核酸序列所需的成本，其打破了摩爾定律的限制，使得獲得基因序列所需的金錢出現了斷崖式的下降，在2008年，全基因組測序的成本降至20萬美元，到2010年，該費用已經可以控制在10000美元以內，目前，測定一個人類的全基因組只需要不到1000美元即可完成。測序技術的發展方向目前，基因測序技術已經在...

⑦側翼序列堿基數，各部分之間用tab鍵隔開。按照這種格式依次對68個基因座進行錄入。68個基因座基因配置文件錄入完成后，運行***。該文件給出了①基因座名稱，②基因分型，③擴增子堿基數，④擴增子序列信息，⑤測序深度五個部分。根據國際法醫遺傳學會(internationalsocietyforforensicgenetics，isfg)發表的關于y-str基因座的str序列指南()和niststr數據庫(strbase.)y染色體str情況說明對67個y-str基因座的序列構建**重復結構。實驗結果見表3。結果表明，標準品2800m得到了完整的str分型，完全能夠滿足法醫str檢驗的...

實施例3、實施例1制備的試劑盒的準確性驗證1、取1ng標準品2800m、樣本一、樣本二或樣本三(見實施例2中步驟二)，按照yfilerpluspcramplifcationkit(thermofisherscientific)的說明書步驟進行毛細管電泳檢測，得到各個基因座的等位基因基因型。分型結果見表4。表4注：m為毛細管電泳檢測技術的分型結果，e為二代測序技術的分型結果。2、按照實施例2中步驟一的方法檢測標準品2800m、樣本一、樣本二或樣本三，得到各個基因座的等位基因基因型。分型結果見表4。結果表明，實施例1制備的試劑盒與yfilerpluspcramplifcationkit重合...

下游的引物IP用于第二輪多重PCR。具體的建庫過程是：步驟1，將樣本DNA進行片段化處理，隨后每個片段兩端加上特殊的接頭；步驟2，加入***輪擴增的上游引物混合池，與特殊接頭互補的通用引物，配制成PCR總體系，進行***輪擴增；步驟3，將***輪PCR產物純化后，加入第二輪擴增的下游引物混合池，與第二步中使用過的特殊接頭互補的通用引物配制成PCR總體系，進行第二輪擴增；步驟4，將第二輪PCR產物純化后，配置反應總體系，進行Q-PCR定量，稀釋到合適的濃度，即可用于二代測序。上述技術方案中，作為推薦，步驟2中，***輪特異性引物是普通的PCR擴增引物，共20個左右的堿基，Tm值設定在60...

測序成本的變化除了測序通量和讀長的進步之外，測序技術的大范圍應用**主要應該歸功于成本的下降，在早期只有***代測序技術之時，人類基因組計劃耗資30億美元才獲得了大部分的人類基因組信息，這樣高昂的成本顯然不是常規科學研究者能夠承受的?；驕y序技術成本變化新一代測序技術的發明和應用**降低了獲取核酸序列所需的成本，其打破了摩爾定律的限制，使得獲得基因序列所需的金錢出現了斷崖式的下降，在2008年，全基因組測序的成本降至20萬美元，到2010年，該費用已經可以控制在10000美元以內，目前，測定一個人類的全基因組只需要不到1000美元即可完成。測序技術的發展方向目前，基因測序技術已經在...

***代測序技術常見問題及解決方法樣品測序無信號此時測序完全失敗，**可能的原因是待測樣品出現了降解或引物失效，從而導致測序引物與待測樣品無法結合。此時探索造成測序失敗的具體原因并無實際意義，**快速、簡便的辦法是重新提供質量合格的引物和樣品再次進行測序。樣品測序信號差此種情況可能是引物或模板的質量不高或是引物和模板的匹配性不好引起的，但**有可能的原因是待測樣品濃度偏低。待測樣品濃度偏低可能是由于PCR效率較低，也可能是PCR與測序間隔時間過長，導致PCR產物降解。建議PCR完成后盡快進行測序，如果PCR產物濃度本身較低，可以使用PCR產物作為模板進行二次PCR，也可以對PCR產...

1977年，WalterGilbert和FrederickSanger發明了***臺測序儀，并應用其測定了***個基因組序列，噬菌體X174，全長5375個堿基。由此開始，人類獲得了探索生命遺傳本質的能力，生命科學的研究進入了基因組學的時代，到至今為止的四十年時間內，測序技術已取得了相當大的發展，從***代發展到了第三代測序技術。Sanger所發明的測序方法被稱為***代測序技術，該技術直到現在依然被***使用，但是其一次只能獲得一條長度在700～1000個堿基的序列，無法滿足現代科學發展對生物基因序列獲取的迫切需求。高通量測序(High-ThroughputSequencing,...

于是，每個反應會產生許多不同長度的DN**段，并在模版的任一核苷酸位置上由其中一種雙脫氧核糖核苷酸終止鏈的延伸。反應混合物可以通過手動灌膠或自動灌膠到用毛細管進入測序機器，再根據DNA分子大小不同用電泳分離DNA。當DNA流過凝膠后，DNA序列可以通過雙脫氧核糖核苷酸上發出的熒光來進行分析。當今的Sanger測序儀使用的是毛細管自動上樣的凝膠電泳，一般可以同時分析8-96個系列反應。二代測序系統在十年前就是因其可同時進行大量平行測序反應而廣為人知。這些系統可以同時分析百萬甚至上億個序列反應。雖然不同的機器生產時會在技術細節上有許多不同，但他們都有以下幾個共同點：1,文庫建立：所有二...

第三代測序技術以PacBio公司的SMRT技術和OxfordNanoporeTechnologies公司的納米孔單分子技術為**的新一代測序技術被稱為第三代測序技術，與前兩代測序技術相比，其比較大的特點就是單分子測序，測序過程無需進行PCR擴增，并且理論上可以測定無限長度的核酸序列。PacBio技術平臺SMRT芯片是一種帶有很多ZMW孔的厚度為100nm的金屬片，將DNA聚合酶、待測序列和不同熒光標記的dNTP放入ZMW孔的底部。熒光標記的位置是磷酸基團，當一個dNTP被添加到合成鏈上的同時，它會進入ZMW孔的熒光信號檢測區，根據熒光的種類就可以判定dNTP的種類，從而獲得核酸的堿...

⑦側翼序列堿基數，各部分之間用tab鍵隔開。按照這種格式依次對68個基因座進行錄入。68個基因座基因配置文件錄入完成后，運行***。該文件給出了①基因座名稱，②基因分型，③擴增子堿基數，④擴增子序列信息，⑤測序深度五個部分。根據國際法醫遺傳學會(internationalsocietyforforensicgenetics，isfg)發表的關于y-str基因座的str序列指南()和niststr數據庫(strbase.)y染色體str情況說明對67個y-str基因座的序列構建**重復結構。實驗結果見表3。結果表明，標準品2800m得到了完整的str分型，完全能夠滿足法醫str檢驗的...

室溫孵育1分鐘。e.孔板再次放上磁力架，等待2分鐘，溶液澄清后，轉移上清到新的孔板中。三、第二輪多重PCRa.第二輪特異性引物是普通的PCR擴增引物，在其5’端加上測序接頭5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’共80個左右的堿基，其中根據目標區域設計得到的序列長度是20個堿基左右，Tm值設定在60℃，多個引物混成一個IP引物池做為第二輪PCR的上游引物。P7的序列：5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAG-3’。配置PCR總體系，按照理論值的125％配制，震蕩混勻，短時離心。b.孔板放入...

細胞鑒定：表面標志物鑒定（流式細胞術），分化能力鑒定（間充質干細胞成骨分化、間充質干細胞成脂分化、間充質干細胞成軟骨分化），核型分析；細胞轉染：慢病毒、腺相關病毒、腺病毒、質粒、microRNA、lncRNA等轉染服務；免疫學分析：免疫細胞化學、免疫熒光、激光共聚焦、westernblot、Co-IP、ELISA等；分子技術：qPCR、PCR、***定量PCR等。關鍵詞：人骨髓間充質干細胞、人臍帶間充質干細胞、人臍帶血間充質干細胞、人羊膜間充質干細胞、人胎盤間充質干細胞、人脂肪間充質干細胞、大鼠骨髓間充質干細胞、大鼠脂肪間充質干細胞、小鼠骨髓間充質干細胞、小鼠脂肪間充質干細胞、兔骨髓間...

不同的二代測序平臺的區別主要體現在測序反應的技術上，這些差別可以分為4類：焦磷酸測序，合成法測序，連接法測序和離子半導體測序。焦磷酸測序在焦磷酸測序中，測序反應通過每個核苷酸結合過程中釋放的焦磷酸來調控。釋放的焦磷酸參與了一系列化學反應從而導致鏈光的產***出的光由記錄基因蔟相應序列的相機來檢測。測序反應開始后，先一次孵育一個堿基，測量光發射情況（如果有的話），在降解未參與反應的堿基，***加入另一個堿基。這項技術能夠產生較大的讀取長度，已經可以與Sanger測序法得到的讀取長度相比較。然而，高昂的試劑花費，和有6個或以上的均聚物會產生的高錯誤率阻礙了這個技術的應用。合成法測序合成...

二代測序是一個強大的功能平臺，它可以同時給數以萬計的DNA分子進行測序。由于這種可以多個樣本同時測序的能力，在個性化醫療、遺傳疾病和臨床診斷等方面，二代測序也就是高通量測序開創了**性的領域。早在1900年代就發明的Sanger測序法，成為了DNA測序的黃金法則，即便到了***它仍被***用來進行常規測序和NGS數據的驗證。它利用高保真DNA聚合酶生成與單鏈DNA模版互補的拷貝。在每個反應中，一個可以特異性識別模版的單鏈引物，可以從3端開始啟動DNA合成，根據堿基互補配對原則，脫氧核糖核苷酸或簡單的核苷酸是一個接一個的與模版配對。NGS平臺自身的軟件大多是做分析及報告的，樣本管理或...

于是，每個反應會產生許多不同長度的DN**段，并在模版的任一核苷酸位置上由其中一種雙脫氧核糖核苷酸終止鏈的延伸。反應混合物可以通過手動灌膠或自動灌膠到用毛細管進入測序機器，再根據DNA分子大小不同用電泳分離DNA。當DNA流過凝膠后，DNA序列可以通過雙脫氧核糖核苷酸上發出的熒光來進行分析。當今的Sanger測序儀使用的是毛細管自動上樣的凝膠電泳，一般可以同時分析8-96個系列反應。二代測序系統在十年前就是因其可同時進行大量平行測序反應而廣為人知。這些系統可以同時分析百萬甚至上億個序列反應。雖然不同的機器生產時會在技術細節上有許多不同，但他們都有以下幾個共同點：1,文庫建立：所有二...

01FGFR簡介及信號通路成纖維細胞生長因子受體(FGFR)是高度保守、***分布的跨膜酪氨酸激酶受體，包括FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4四種受體亞型。成纖維細胞生長因子（FGF）與FGFR結合時，受體二聚化，從而引起受體激酶結構域的細胞內磷酸化、細胞內信號傳導和基因轉錄的級聯反應[1]。由FGFR***的信號轉導通路包括RAS–RAF–MAPK，PI3K–AKT，STAT和PLC途徑，它們參與調控多種生物學過程，如***發育、血管新生、細胞增殖、遷移、抗凋亡等（圖1）。圖1FGFR信號通路[2-4]當FGFR發生突變或者過表達時，會引起四個關鍵的下游信號通路的過度...

panFGFxpanel的優勢在于：針對性強——panel“小而精”，集中研究FGFR及上下游信號通路關鍵基因；應用性廣——panel小，成本低；搭配酶切建庫法、快速雜交法，縮短TAT；靈活性強——探針可實現物理上模塊區分，隨時滿足伴隨診斷產品開發需求。??方案3：IHC法檢測FGF-19過表達當前針對肝*及乳腺*的FGFR4抑制劑開發速度很快，多個藥物進入臨床II期的研究。FGFR4-FGF19信號通路在肝細胞*（HCC）的發***展過程中發揮重要的作用。有研究顯示，在骨骼肌中過表達FGF19的轉基因小鼠在其生命早期會發生多發性HCC，而其他組織則不會受到影響，初步推斷FGF19通過**...

于是，每個反應會產生許多不同長度的DN**段，并在模版的任一核苷酸位置上由其中一種雙脫氧核糖核苷酸終止鏈的延伸。反應混合物可以通過手動灌膠或自動灌膠到用毛細管進入測序機器，再根據DNA分子大小不同用電泳分離DNA。當DNA流過凝膠后，DNA序列可以通過雙脫氧核糖核苷酸上發出的熒光來進行分析。當今的Sanger測序儀使用的是毛細管自動上樣的凝膠電泳，一般可以同時分析8-96個系列反應。二代測序系統在十年前就是因其可同時進行大量平行測序反應而廣為人知。這些系統可以同時分析百萬甚至上億個序列反應。雖然不同的機器生產時會在技術細節上有許多不同，但他們都有以下幾個共同點：1,文庫建立：所有二...

h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)個體識別；(h4)親權鑒定；(h5)種族推斷。本發明還保護上述任一所述引物組合或上述任一所述復合擴增體系的應用，可為(h1)-(h5)中的至少一種：(h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)個體識別；(h4)親權鑒定；(h5)種族推斷。上述任一所述68個基因座具體可由amelogenin、dys19、dys385a/b、dyf387s1a/b、dys388、dys389-i、dys389-ii、dys390、dys391、dys392、dys393、dyf399s1、dyf404s1a/b、dys437、dys438、dy...

2、IlluminaSolexa測序方法：由Solexa公司開發，2006年發布，于2007年被Illumina收購，并將測序儀命名商品化為IlluminaGenomeAnalyzer（簡稱GA）；Illumina不斷升級GA，特別是HiSeq系列測序儀的研發完成，由此打破了***的“摩爾定律”?；玖鞒蹋海?）構建測序文庫。提取基因組DNA，隨機打斷成100-200bp片段，末端加上接頭；（2）橋式擴增。解鏈后的單鏈DN**段兩端被分別固定于芯片上，形成橋狀結構，進行橋式PCR擴增。經過PCR擴增，產生數百萬條待測的DN**段，隨后被線性化；（3）測序。將熒光標記的dNTP、聚合...

二代測序是一個強大的功能平臺，它可以同時給數以萬計的DNA分子進行測序。由于這種可以多個樣本同時測序的能力，在個性化醫療、遺傳疾病和臨床診斷等方面，二代測序也就是高通量測序開創了**性的領域。早在1900年代就發明的Sanger測序法，成為了DNA測序的黃金法則，即便到了***它仍被***用來進行常規測序和NGS數據的驗證。它利用高保真DNA聚合酶生成與單鏈DNA模版互補的拷貝。在每個反應中，一個可以特異性識別模版的單鏈引物，可以從3端開始啟動DNA合成，根據堿基互補配對原則，脫氧核糖核苷酸或簡單的核苷酸是一個接一個的與模版配對。每個反應還包含四種雙脫氧核糖核苷酸的混合物，每一種對...

本發明涉及生物技術領域，特別涉及二代測序文庫構建技術。背景技術：二代測序由于其超高的測序能力在科研和臨床中具有極為重要的應用。二代測序技術也稱深度測序、大規模平行測序，**思想是邊合成邊測序(SequencingbySynthesis)，即通過捕捉新合成的末端的標記來確定DNA的序列，現有的技術平臺主要有Roche/454FLX、Illumina/SolexaGenomeAnalyzer和AppliedBiosystemsSOLIDsystem。這三個技術平臺各有優點，454FLX的測序片段比較長，高質量的讀長能達到400bp；Solexa測序性價比**高，不*機器的售價比其他兩種低，...

pcrpurificationkit為德國qiagen公司的產品，產品目錄號為y5-28006。。qubittmdsdnahsassaykit為thermofisher公司的產品，貨號為q32854。truseqdnapcr-freehtlibraryprepkit為illumina公司的產品，產品目錄號為fc-121-3003。kapalibraryquantificationkit為kapa公司的產品，產品目錄號為kk4824。miseqreagentkitv3-600cycles測序試劑為illumina公司的產品，貨號為ms-102-3003。miseqfgx二代測序儀為ill...