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上海免疫沉淀磁珠價格

來源： 發布時間：2024-07-26

RIP技術的優勢在于：
1. 特異性：利用特異性抗體，可以精確地捕獲目標RNA結合蛋白及其相互作用的RNA。
2. 應用場景多：適用于研究RNA結合蛋白、miRNA、lncRNA等非編碼RNA與蛋白質的相互作用。
3. 技術結合：RIP后的RNA可以用于多種下游分析，如qPCR、測序等，為研究RNA的功能和調控提供了重要信息。
RIP技術的限制包括：
1. 抗體質量：需要高質量的特異性抗體，否則可能得到假陽性或假陰性結果。
2. 非特異性結合：可能存在非特異性結合問題，需要仔細的實驗設計和對照來控制。
免疫沉淀Co-IP技術選瓊脂糖珠還是磁珠？上海免疫沉淀磁珠價格

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免疫沉淀實驗不同于WB實驗的樣品制備，對實驗樣品制備要求更高，除了要控制所有操作盡量在冰上完成外，關鍵的是裂解液的成分，裂解液成分直接決定了樣品質量。
主要影響：
1. 蛋白的釋放：許多目的蛋白定位在細胞器，質膜，細胞核，細胞骨架中，但通常這些亞細胞結構很難被裂解液有效溶解，所以很難將這些蛋白釋放出來。
2. 蛋白相互作用：不同去垢劑對不同性質的蛋白質間相互作用影響程度不同，一些互作較弱的蛋白對盡管在比較溫和的裂解液配方中仍然會被破壞。
杭州免疫沉淀實驗原理免疫沉淀技術IP是什么？

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免疫沉淀技術的實驗方法通常包括以下步驟：
1. 樣本準備
2. 細胞裂解：使用裂解緩沖液（含有蛋白酶抑制劑以防止蛋白質降解）裂解細胞，釋放蛋白質。
3. 蛋白質濃度測定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測定裂解液中蛋白質的濃度。
4. 抗體預處理：如果使用預固定的抗體，需先將抗體固定在固相支持物上，如瓊脂糖珠或磁性微珠。
5. 免疫沉淀反應：將裂解液與特異性抗體（固定或未固定）混合，并在4°C下緩慢搖晃孵育過夜，以允許抗體與目標蛋白質充分結合。
6. 固相支持物的回收：對于未固定的抗體，加入與抗體特異性結合的蛋白A或蛋白G結合的固相支持物。
7. 洗滌：去除未結合的蛋白質和雜質，通常需要多次洗滌固相支持物。
8. 洗脫：使用適當的洗脫緩沖液（如加熱的SDS加載緩沖液或酸性緩沖液）從固相支持物上洗脫免疫復合物。
9. 后續分析：對洗脫的蛋白質進行SDS-PAGE電泳、Western Blot、質譜分析等，以進一步分析目標蛋白質。
10. 對照實驗：包括正對照（已知能沉淀目標蛋白的抗體）和負對照（非特異性抗體或無抗體）以驗證實驗的特異性。

RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）的實驗設計需要考慮多個方面，以確保實驗的準確性和可重復性。
1. 目標蛋白的選擇：確定你想要研究的目標RNA結合蛋白（RBP）。
2. 陽性和陰性對照：設計實驗時，需要包括陽性對照和陰性對照。
3. 細胞培養與裂解：選擇合適的細胞類型進行培養。
4. 抗體孵育：將特異性抗體與細胞裂解液孵育，以形成抗體-蛋白質-RNA復合物。
5. 免疫沉淀：使用蛋白A或蛋白G結合的珠子進行免疫沉淀，捕獲抗體-蛋白質-RNA復合物。
6. 洗滌和分離：洗滌珠子以去除未特異性結合的蛋白質和RNA。從珠子上分離RNA，可能需要使用低pH緩沖液或蛋白酶K處理。
7. RNA分析：使用qPCR、Northern blot或RNA-Seq等方法分析沉淀下來的RNA。
8. 數據分析：對實驗結果進行定量分析，比較不同樣品之間的RNA水平。

9. 實驗重復：為了確保結果的可靠性，實驗應該進行至少三次重復。 免疫沉淀和免疫共沉淀的區別？

10. 技術驗證：使用其他技術（如RNA-pull down或FISH）驗證RIP實驗結果。
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免疫沉淀技術（Immunoprecipitation, IP）是一種用于研究蛋白質相互作用、蛋白質復合物組成以及特定蛋白質的表達和純化的實驗技術。
基本原理
免疫沉淀技術基于抗體與特定蛋白質（抗原）之間的特異性相互作用。通過使用針對目標蛋白質的特異性抗體，可以從含有多種蛋白質的復雜樣本中捕獲并富集目標蛋白質。
免疫沉淀技術有多種類型，包括：
1. 個別免疫沉淀法（Individual IP）
2. 免疫共沉淀法（Co-IP）
3. 染色質免疫沉淀法（ChIP）
4. RNA免疫沉淀法（RIP）
近年來，免疫沉淀技術在固相支持物的選擇上有了很大進步。磁性微珠因其操作簡便、快速和自動化程度高而逐漸取代了傳統的瓊脂糖樹脂。
免疫沉淀技術RIP的實驗設計。杭州免疫沉淀實驗原理

免疫沉淀技術Co-IP的實驗設計。上海免疫沉淀磁珠價格

免疫沉淀技術（Immunoprecipitation, IP）的實驗方法通常包括以下步驟：
1. 樣本準備
2. 蛋白質濃度測定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測定裂解液中蛋白質的濃度。
3. 抗體預處理：如果使用預固定的抗體，需先將抗體固定在固相支持物上，如瓊脂糖珠或磁性微珠。
4. 免疫沉淀反應：將裂解液與特異性抗體（固定或未固定）混合，并在4°C下緩慢搖晃孵育過夜，以允許抗體與目標蛋白質充分結合。
5. 固相支持物的回收：對于未固定的抗體，加入與抗體特異性結合的蛋白A或蛋白G結合的固相支持物。
6. 洗滌：去除未結合的蛋白質和雜質，通常需要多次洗滌固相支持物。
7. 洗脫：使用適當的洗脫緩沖液（如加熱的SDS加載緩沖液或酸性緩沖液）從固相支持物上洗脫免疫復合物。
8. 后續分析：對洗脫的蛋白質進行SDS-PAGE電泳、Western Blot、質譜分析等，以進一步分析目標蛋白質。
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