在生命科學研究的復雜版圖中,蛋白質相互作用網絡的解析是揭示生命奧秘的關鍵環節。Co-IP 免疫沉淀(免疫共沉淀)技術作為研究蛋白質相互作用的經典方法,為科研人員深入探索細胞內分子機制提供了極為有力的工具。Co-IP 免疫沉淀的原理基于蛋白質之間的相互結合以及抗原 - 抗體的特異性識別。在細胞內,許多蛋白質并非孤立存在,而是與其他蛋白質形成復合物共同行使生物學功能。當細胞裂解后,這些蛋白質復合物依然能夠保持相對的穩定。在病毒機制研究中,免疫沉淀揭示病毒蛋白與宿主蛋白關聯,為抗病毒藥物研發奠基。廣州RIP免疫沉淀磁珠現貨
之后加入固相載體,使其與抗體結合,形成穩固的免疫復合物。通過離心,將免疫復合物沉淀到離心管底部,去除上清液,此時沉淀中就富集了目標抗原及與之相互作用的分子。為了提高純度,還需對沉淀進行多次洗滌,去除非特異性結合的雜質。,使用洗脫緩沖液將目標抗原從免疫復合物中洗脫下來,得到可供后續分析的樣品。免疫沉淀技術在多個領域有著廣泛的應用。在蛋白質-蛋白質相互作用研究中,它能夠幫助科研人員鑒定與目標蛋白質相互作用的其他蛋白質,從而揭示蛋白質復合物的組成和功能。上海Protein AG免疫沉淀實驗視頻蛋白質組學研究中,免疫沉淀可有效分離出與目標蛋白相互作用的其他蛋白,助力機制探索。
這些固相載體與抗體結合后,使得抗原-抗體復合物能夠被沉淀下來,經過離心等操作,將沉淀與上清液分離,再通過洗脫等步驟,即可獲得富集的目標抗原及其相互作用的分子。免疫沉淀的操作流程較為精細。第一步是細胞培養與裂解。科研人員需要根據研究目的,選擇合適的細胞系進行培養,待細胞生長至合適狀態后,使用特定的裂解緩沖液將細胞裂解,釋放出細胞內的生物分子。接著進行抗體孵育,將特異性抗體加入到細胞裂解液中,在適宜的溫度和時間條件下,讓抗體與目標抗原充分結合。
隨后,借助偶聯了特定抗體結合蛋白(如 Protein A 或 Protein G)的固相載體,通過離心或磁分離等手段,就能將復合物從復雜的細胞裂解物中高效分離出來。與其他蛋白質分離技術相比,免疫沉淀技術具有獨特優勢。例如,相較于傳統的親和層析,免疫沉淀對低豐度蛋白的捕獲能力更強,能在復雜背景下精細富集目標蛋白。同時,它能更好地保留蛋白質的天然狀態及相互作用關系,這對于研究蛋白質復合物的組成與功能至關重要。在藥物研發領域,免疫沉淀技術發揮著關鍵作用。通過研究藥物靶點蛋白與其他蛋白的相互作用,科學家可以深入了解藥物的作用機制。選擇高特異性抗體是免疫沉淀成功的關鍵,確保目標蛋白的高效捕獲與純化。
隨后,引入一種固相載體,如蛋白 A 或蛋白 G 偶聯的瓊脂糖珠。這些固相載體能夠與抗體的 Fc 段結合,從而將抗原 - 抗體復合物從溶液中沉淀下來。經過多次洗滌步驟,去除未結合的雜質,通過適當的方法,如加熱或添加洗脫緩沖液,將目標分子從復合物中釋放出來,以便后續的分析檢測。免疫沉淀技術在多個領域有著廣泛的應用。在基礎科研中,它常被用于研究蛋白質 - 蛋白質相互作用,通過捕獲與目標蛋白相互結合的其他蛋白,繪制蛋白質相互作用網絡,有助于揭示細胞內復雜的生物學過程。病毒研究中,免疫沉淀可用于分離病毒抗原,為疫苗研發提供關鍵支持。廣州Co IP免疫沉淀外包公司
該技術在疾病機制研究、藥物靶點篩選等領域具有重要應用價值。廣州RIP免疫沉淀磁珠現貨
其具體實驗流程通常包括以下幾個關鍵步驟。首先是細胞或組織裂解,將樣本置于合適的裂解液中,通過物理或化學方法破碎細胞,釋放出細胞內的蛋白質等生物分子。接著,向裂解液中加入特異性抗體,在適宜的條件下孵育,讓抗體與目標蛋白充分結合形成復合物。之后加入 Protein A/G 珠子,再次孵育,使復合物與珠子結合。通過離心或磁力分離,將結合有目標蛋白的珠子從溶液中分離出來,經過多次洗滌去除非特異性結合的雜質。,使用洗脫液將目標蛋白從珠子上洗脫下來,得到純化的目標蛋白,可用于后續的分析檢測。廣州RIP免疫沉淀磁珠現貨