實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加入CCK-8試劑時(shí)，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基頁面下加，容易產(chǎn)生氣泡，會(huì)干擾OD值讀數(shù)。白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的*小接種量至少為1,000 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2,500 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450nm濾光片的檢測(cè)靈敏度*高。如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基，去掉藥物的影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。使用ELISA讀數(shù)器對(duì)溶解的甲臜產(chǎn)物進(jìn)行分光光度計(jì)量化。免疫熒光標(biāo)記

隨著病毒生物學(xué)的發(fā)展，種類繁多的病毒載體已越來越成為向各種實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（如細(xì)胞系、原代細(xì)胞、組織臟器等）轉(zhuǎn)運(yùn)核酸的重要工具。除了在實(shí)驗(yàn)室的組織培養(yǎng)和動(dòng)物模型生產(chǎn)中發(fā)揮重要作用，它們還被用于zhi 療遺傳性疾病的臨床試驗(yàn)中。目前主流的病毒載體系統(tǒng)主要包括慢病毒（LV）、（γ-）逆轉(zhuǎn)錄病毒（RV）、腺病毒（Ad）和腺相關(guān)病毒（AAV）。我們分述之。慢病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒均屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科。其典型特征為其RNA基因組能逆轉(zhuǎn)錄為cDNA副本，cDNA副本又能穩(wěn)定整合至宿主細(xì)胞基因組中（這就是常說的穩(wěn)轉(zhuǎn)）。逆轉(zhuǎn)錄病毒通常分兩種：簡(jiǎn)單的（有時(shí)又稱為致ai病毒或γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒，如鼠白血病病毒）和復(fù)雜的（如慢病毒）。這些亞型間主要的差異在于復(fù)雜的逆轉(zhuǎn)錄病毒存在一些附屬基因和調(diào)控基因，而簡(jiǎn)單的則沒有（下文有進(jìn)一步的討論）。這兩類病毒顆粒都含有兩份正鏈RNA，RNA上附有病毒反轉(zhuǎn)錄酶（RT），它們位于病毒的內(nèi)核（圖1）。位于內(nèi)核的還有結(jié)構(gòu)蛋白和酶，包括核殼（NC）、衣殼（CA）、整合酶（IN）和蛋白酶（PR）。內(nèi)核由一圈外周蛋白層包圍，外周蛋白包括基質(zhì)蛋白（MA），基質(zhì)蛋白又被來源于宿主細(xì)胞細(xì)胞膜插有包膜糖蛋白的腹膜所包圍。原代內(nèi)皮細(xì)胞分離試劑盒免疫腫/瘤學(xué)試劑盒可檢測(cè)可溶性免疫檢查點(diǎn)分子，有助于提供ai癥免疫的全/面信息。

細(xì)胞毒性是由合成化合物、細(xì)胞自然產(chǎn)生毒性或免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞(如細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞,自然殺傷細(xì)胞等)引起的細(xì)胞殺傷事件。目前主要通過對(duì)受損細(xì)胞釋放的相關(guān)底物(如乳酸脫氫酶-LDH)進(jìn)行定量,從而判斷細(xì)胞膜的受損情況。本期，將為大家講解有關(guān)細(xì)胞毒性的檢測(cè)產(chǎn)品、原理及特點(diǎn)等內(nèi)容。

細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)是生物相容性測(cè)試的一種，檢測(cè)藥物或者新型材料在生物環(huán)境中的毒性情況，即通過檢測(cè)材料或者藥物對(duì)細(xì)胞的增殖或者生長(zhǎng)的影響，來評(píng)價(jià)藥物或材料的毒性或者活性，主要用于藥物活性篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、抗**藥效測(cè)定等；常用MTT法或者CCK-8法檢測(cè)，另外也可以通過Live/dead雙染法進(jìn)行細(xì)胞成像，更直觀的記錄細(xì)胞的存活情況。

其局限性：① ELISA數(shù)據(jù)不能提供單個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生因子的能力和頻率；②因受刺激細(xì)胞群的細(xì)胞因子產(chǎn)生是短暫的，并且不同細(xì)胞因子基因的表達(dá)動(dòng)力學(xué)可以變化，故可能需要在幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集測(cè)試樣品以更好地表征實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或培養(yǎng)細(xì)胞群的細(xì)胞因子產(chǎn)生。③在任何一個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)量的細(xì)胞因子蛋白濃度可能反映細(xì)胞因子分泌，細(xì)胞因子攝取的并發(fā)過程。通過細(xì)胞和細(xì)胞因子蛋白降解。由于這些過程，測(cè)量的細(xì)胞因子蛋白水平可能xian zhu低估細(xì)胞的實(shí)際細(xì)胞因子產(chǎn)生潛力。④試劑不統(tǒng)一，標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，故定量不準(zhǔn)確等。為雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)期間和之后定性和定量抗體類別同種型提供了一種快速靈敏且簡(jiǎn)便的方法，用于評(píng)估免疫應(yīng)答。

ELISA是一種基于酶的免疫測(cè)定方法，由于酶標(biāo)的放大作用，利用酶標(biāo)記抗體的免疫檢測(cè)，因其高特異性和敏感性而日益受到人們的青睞。細(xì)胞因子夾心ELISA是一種敏感的酶免疫分析方法，可以特異性地檢測(cè)和定量可溶性細(xì)胞因子和趨化因子蛋白的濃度。這一方法的基本原理是：①將已知抗體結(jié)合到某種固相載體表面；②加待測(cè)抗原，如兩者是特異的，則發(fā)生結(jié)合，然后把多余抗體洗除；③加入與待測(cè)抗原呈特異反應(yīng)的酶聯(lián)抗體，使形成“夾心”；④加入該酶的底物，若看到有色的酶解產(chǎn)物產(chǎn)生，說明在孔壁上存在相應(yīng)的抗原，利用酶標(biāo)儀測(cè)其OD值。有色產(chǎn)物的量與待測(cè)抗原的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析。FACS可以用于分離表達(dá)GFP的細(xì)胞和不表達(dá)GFP的細(xì)胞。外泌體檢測(cè)

幾乎不受環(huán)境pH影響。免疫熒光標(biāo)記

來自蛋白質(zhì)的生物熒光，如綠色熒光蛋白(GFP)可能已經(jīng)在水母等生物中存在了數(shù)百萬年。直到20世紀(jì)60年代，科學(xué)家才開始真正研究綠色熒光蛋白，并推斷出它的生化特性。現(xiàn)在，GFP及其熒光衍生物已成為實(shí)驗(yàn)室的主要研究對(duì)象。GFP被廣泛應(yīng)用于生物學(xué)科的研究，包括：標(biāo)記基因以闡明其表達(dá)或定位，作為生物傳感器或細(xì)胞標(biāo)記，研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，可視化啟動(dòng)子活性等等。

GFP是一種由238個(gè)氨基酸組成的大約27kda的蛋白，來源于水晶水母Aequorea victoria。它的熒光發(fā)射波長(zhǎng)在可見光譜的綠色部分(因此得名)，這是由于蛋白中心的三個(gè)特定氨基酸(Ser65、Tyr66和Gly67)成熟反應(yīng)形成的發(fā)色團(tuán)。第yi次發(fā)現(xiàn)時(shí)，GFP*令人覺得不可思議的一點(diǎn)是發(fā)色團(tuán)自發(fā)形成，不需要額外的輔助因子、底物或酶活性——它只需要在成熟過程中存在氧氣。這意味著該蛋白可以直接從維多利亞藻中提取，并在任何生物體中表達(dá)，同時(shí)仍然保持熒光。 免疫熒光標(biāo)記

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1、原代細(xì)胞：ScienCell（中國(guó)區(qū)正規(guī)一級(jí)代理）人源和動(dòng)物源各種原代細(xì)胞。

2、培養(yǎng)基：原代細(xì)胞**低血清、無血清、無異源蛋白無動(dòng)物成分培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑：胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。

4、細(xì)胞系（株）：種類豐富（1000余種），已通過STR鑒定；提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。

5、自研產(chǎn)品：支原體檢測(cè)/qing除試劑盒、端粒酶檢測(cè)試劑盒、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。

6、技術(shù)服務(wù)：綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建，細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。