甲基化敏感性高分辨率熔解曲線分析(MS-HRM)

通過熔解曲線分析可以將單堿基序列的差異轉變成熔解曲線的差異，因此DNA樣本經過亞硫酸氫鹽處理后，甲基化與未甲基化DNA會存在序列差異，這種差異可通過熔解曲線分析來發現。使用該方法進行甲基化分析*需一對引物，相對簡單，不過這種方法對儀器的要求頗高，需要帶HRM模塊的熒光定量PCR儀，并且在進行實時定量PCR過程中，需要使用飽和的熒光染料。利用MS-HRM技術進行甲基化檢測只能對檢測片段整體甲基化情況進行分析，并不能明確每個CpG位點的甲基化狀態。因此這種技術適用于大量樣本的檢測，篩選出感興趣的CPG位點，然后利用其他方法進行單個位點的精確檢測及甲基化程度的精確定量。 焦磷酸測序能提供基于序列測定的SNP檢測、等位基因頻率分析和甲基化檢測。技術服務經驗豐富

    2019國自然基金解析—甲基化研究專題。從生命科學部和醫學科學部總體來看：2019年度，生命科學部獲自然科學基金委批準資助6478項（不含杰出青年基金項目），批準資助金額共計，單項平均資助金額。2019年度，醫學科學部共批資助10138項（不含杰出青年基金項目），批準資助金額共計，單項平均資助金額。從甲基化研究方向來看，與甲基化研究相關的項目總數達283項，項目總金額超過12669萬元。其中生命科學部項目總數62項，項目金額3235萬元，醫學科學部項目總數221項，項目金額9434萬元。從2011-2019年甲基化研究方向的項目金額和項目數目分析，整體呈上升趨勢；從醫學科學部來看，甲基化研究項目獲批數量221項，項目金額達到9434萬，較之2018年度項目獲批金額（7166萬元）上升趨勢尤為明顯，可以看出，甲基化研究日益成為國自然的研究熱點。 浙江單細胞測序技術服務歡迎咨詢云生物提供DNA甲基化和羥甲基化的表觀實驗和信息分析技術服務。

DNA甲基化對基因表達調控起著動態的重要作用。 借助MethylationEPIC BeadChip，研究人員可以基于單核苷酸分辨率定量檢測基因組中的850,000多個甲基化位點。包括FFPE在內的多重樣本可以并行分析，以便在每樣本比較低成本的情況下實現高通量功能。依托業界**的Infinium實驗分析方法，MethylationEPIC BeadChip是全表觀基因組關聯研究(EWAS)的理想之選。它提供了由**精選的***的覆蓋范圍，囊括99%的RefSeq基因，95%的CpG島，高覆蓋度的增強子區域和其他內容類別。由于超過90%的Infinium HumanMethylation450K位點內容都涵蓋在內，因此新一代MethylationEPIC試劑盒對這些位點也完全支持。

    DNA羥甲基化(5hmC)是被認為是哺乳動物基因組上的第六堿基。Bisulfite-Seq并不能區分甲基化(5mC)和羥甲基化(5hmC)，實際上是5mC和5hmC兩種修飾的混合信號，而通過氧化亞硫酸鹽測序(oxidativebisulfitesequencing,oxBS-Seq)，先將5hmC氧化為甲酰基修飾(5fC)，進而被亞硫酸鹽轉換為堿基U，實現DNA甲基化的精細檢測。而同時對樣本進行BS-Seq和oxBS-Seq測序則可實現對5hmC全基因組，單堿基分辨率的檢測，是羥甲基化檢測的金標準方案。(12):1730-1741.(IF=)作者利用全基因組氧化-亞硫酸鹽測序(WGBS/oxWGBS)得到了肝臟和肺以及配對**組織的全基因組DNA甲基化和羥甲基化圖譜。在活躍的基因中，5hmC在CpGIslandshore中呈***富集狀態，而在CpGIsland中則呈稀缺狀態。對啟動子、基因體和轉錄終止區域的羥甲基化分析，羥甲基化與基因表達有很強的正相關，這表明5hmC是活躍基因的標記，并且可以在由DNA去甲基化調節的基因表達中發揮作用。 云生物提供甲基化服務。

技術優勢

1、ChIP-Seq 能實現真正的全基因組分析。目前所能獲得的芯片上固定的探針只能**全基因組部分序列，所獲得的雜交信息具有偏向性。

2、對于結合位點分析，ChIP-Seq 通過尋找“峰”，結合分辨率可精確到10~30 bp，而芯片上探針由于長度所限，無法精確定位，即使目前比較高水平的商業芯片都無法提供可與ChIP-Seq 媲美的分辨率。

3、是所需樣本數量。ChIP-chip 需要多達4~5 μg?的起始樣本，在雜交之前需要進行LM-PCR，但可能導致背景增高，競爭性擴增等導致假陽性。而ChIP-Seq *需要納克級起始材料，如SOLiD 起始材料可低至20ng。 篩選耐藥的相關biomaker及表觀調控機制。陜西焦磷酸測序技術服務方案

5mc是表觀遺傳重要的一種修飾，存在于植物、動物等真核生物基因組中，被譽為“第五堿基”。技術服務經驗豐富

    將待測DNA經過亞硫酸鹽處理，通過PCR擴增過程引入T7啟動子序列，經T7DNA聚合酶的體外轉錄過程得到各樣本RNA產物，經堿基特異性酶切處理，得到RNA小片段，并用飛行質譜檢測每個片段的分子量，***EpiTYPER程序完成數據的自動化處理并報告每個檢測片段的甲基化程度。技術優勢·檢測片段長：擴增片段長度可達500bp·高靈敏度：可發現低至5%甲基化水平，樣本起始量低至10ng。·重復性好：變異系數CV≤5%。·高性價比：用384孔板進行PCR反應，一個擴增產物可以進行多重CpG位點分析，無需后續驗證，可直接用于文章發表。服務內容1.根據客戶提供的序列信息進行預評估；2.進行樣本DNA的分離、純化、質檢及亞硫酸鹽修飾。3.使用特殊設計的一對引物擴增樣本，得到帶有T7RNA聚合酶啟動子序列的擴增產物。4.在體外轉錄體系中，利用T7RNA聚合酶，將擴增產物轉錄為RN**斷。5.利用RNaseA能夠特異性識別并切割RNA中U3’端的特性，將RN**斷切割成攜帶有CpG位點的小片斷。6.使用sequenom®MassArray飛行質譜分析系統檢測產物。由于同一片斷中，只有CpG和CpA之間16Da的分子量差別，即質譜圖中兩者峰的差距。 技術服務經驗豐富