熒光定量法（Methylight）

這種技術是在MSP技術上發展起來的，在MSP擴增過程中利用熒光染料進行定量。TaqMan? 探針法的應用使得該技術具有更高的精確性。其原理與SNP檢測類似，針對亞硫酸氫鹽處理之后的DN**段，在甲基化位點上會存在單堿基的差異，根據這種差異進行探針設計，隨后進行實時定量PCR，就能夠檢測甲基化的差異。這種方法**的優勢在于其高敏感性和較高通量，且無需在PCR后電泳、雜交等操作，減少了污染和操作誤差。但是TaqMan? 探針訂購費用較高，適用于少數位點大量樣本篩選。 DNA甲基化對基因表達調控起著動態的重要作用。四川6mA技術服務口碑推薦

    重亞硫酸鹽處理結合測序是目前檢測甲基化的金標準。除了全基因組甲基化測序技術等研究手段，對于大樣本量甲基化研究來說，更需要靈活、有針對性的技術方案。NGS-BSP方法適合幾個到幾十個基因或者位點進行大樣本甲基化測序或者驗證項目，具有更快速的實驗周期及低成本優勢。技術優勢高效靈活的目標區域甲基化檢測的工具BSP和高通量測序完美結合，單堿基分辨率適合幾個到幾十個位點的大樣本驗證項目適合所有動物樣本、周期快、檢測位點靈活、性價比高科學方案設計從項目背景了解、協助方案設計、實驗材料選取、建庫測序，到數據分析每個項目有特定的科學問題；需要專業、有價值的建議；科學、縝密的設計及時高效的溝通；以保障高質量研究成果樣本要求：基因組DNA:>=1ug(20個區域/位點)；樣品濃度>30ng/ul；無RNA和蛋白污染建庫測序：測序策略：IlluminaHiSeq,PE150；測序深度：>。 重慶cfDNA甲基化技術服務方案N6-甲基脫氧腺苷是原核生物和真核生物的DNA修飾類型之一。

甲基化特異性PCR（MS-PCR）

DNA在亞硫酸氫鹽作用后，DNA CpG若無甲基化，則序列中的C改變為U，若有甲基化則保持不變，因此從理論上講，用不同的引物做PCR，即可檢測出這種差異，從而確定基因有無CpG島甲基化。因此根據目的基因修飾前后的改變，就可以相應設計M和U引物，有時我們需要設計兩輪引物。

這種方法靈敏度高，無需特殊儀器，因此經濟實用，是目前應用**為***的檢測方法。不過也存在一定的局限性，預先需要知道待測片段的DNA序列，引物的設計非常重要。另外，亞硫酸氫鹽處理也十分關鍵，若處理不完全則可能導致假陽性的出現。

    cfDNABS-Seq送樣要求一、送樣類型分離好的血漿二、保存方式分離后的血漿，用ml離心管分裝，例如：1ml/管；放-20℃冰箱中保存（短暫保存，1-2周）；放-80℃冰箱中長期保存(1年以內)；保存期間不能凍融。三、運輸條件干冰運輸：順豐陸運（3-4天時間），夏季10-15公斤干冰；秋冬季10公斤干冰四、抽血要求1、使用Streck**管（不建議使用普通的EDTA-鈉抗凝管），采集10ml外周靜脈血（客戶沒有Streck**管，公司配送）；2、室溫或者放置4℃冰箱中半小時以上，不超過8小時，進行血漿分離步驟五、血漿分離步驟1、4℃條件下以1600g離心10min，離心后將上清（血漿）分裝到2、4℃條件下以16000g離心10min去除殘余細胞，將上清移入新的離心管中，每管分裝1ml;3、血漿樣本存放于-80℃冰箱中保存;使用干冰運輸,提取之前不能凍融。備注1：血漿分離在4℃條件進行，如果客戶沒有冷凍離心機，也可以在室溫條件下進行；備注2：離心后取血漿上清，避免吸取白細胞；通常10ml全血可以獲得4-5ml血漿。 TBS具有高深度、定量、高準確性 。

    cfDNA，cellfreeDNA，就是血液中游離的自身DNA，這些DNA多是從身體的細胞或者白血球破裂釋放出來的，基本上都是無害的，不用多久會被自身清理掉。不過值得一提的是，當孕婦懷孕的時候，胎兒的DNA也會同時釋放到母親的血液里頭去，這是當前火熱的無創唐氏篩查的基礎。通過抽取母親的外周血測序分析其中的游離DNA就可以判斷胎兒是否存在整個染色體或者大片段DNA的變異。有研究已經證實，**患者外周血中的cfDNA總量，要高于健康人。通過這一點，雖然不能武斷的說cfDNA能成為**標志物，但是cfDNA的含量增多，能起到一個較好的提示作用，作為一個初篩的手段。基于cfDNA的液態活檢中，盡管ctDNA在**診斷中的應用是當下cfDNA*****，研究**深入的分支。但是，cfDNA作為液態活檢，不只是局限于**學。例如，有研究報道對于接受***移植手術的病人，可以通過監測術后外周血中具有捐獻者基因特征，片段化的cfDNA含量變化，來評估移植***的排斥情況。 DNA甲基化作為表觀遺傳學研究的重要范疇。四川6mA技術服務口碑推薦

RRBS開發的初衷就是為人和哺乳動物，提供全基因組范圍的、高性價比的甲基化檢測金標準方案。四川6mA技術服務口碑推薦

    DNA甲基化是在DNA甲基化轉移酶(Dnmt)的作用下將甲基選擇性地添加到胞嘧啶上形成5-胞嘧啶的過程，剛被發現時被定義為第五種堿基，實際上它是一種重要的表觀遺傳學標記，在調控基因表達、維持染色質結構、基因印記、X染色體失活以及胚胎發育等生物學過程中發揮著重大的作用，它就像魔術師手中一頂**神奇的“帽子”，帶給世人層出不窮的驚喜。DNA甲基化的發生、保持和去除都處在生物體精細的調控中，一旦發生紊亂，對于動物而言將導致胚胎死亡或者**等重大疾病，對于植物而言將會出現各種的表型缺陷，那么這頂神奇的“帽子”是如何發揮它神奇功用的呢？這個問題成為整個生物界**熱的研究焦點之一。研究者們從DNA甲基化的發生機制，保持機制到去甲基化機制，從基因組甲基化狀況研究到特異位點甲基化狀況研究，從**初CpG位點的研究到non-CpG位點的研究，從高甲基化研究到低甲基化、未甲基化研究，以及與其密切相關的羥甲基化也慢慢進入人們的視野，***多角度解析DNA甲基化。在Nature、Science、Cell等**雜志上經常能看到它熟悉的身影，說它是生物學研究的“寵兒”一點都不為過。正所謂“工欲善其事，必先利其器”。 四川6mA技術服務口碑推薦