坐骨神經慢性壓迫致痛模型_艾菱菲生物周期短,效率高
一、背景
坐骨神經慢性壓迫致痛模型(Chronic Constriction Injury, CCI)是研究神經病理性疼痛的重要工具,廣泛應用于藥物開發、疼痛機制探索及***策略評估。神經病理性疼痛由神經損傷或功能異常引起,表現為自發性疼痛、痛覺過敏和觸誘發痛等特征。CCI模型通過模擬人類坐骨神經受壓狀態(如椎間盤突出或神經根壓迫),能有效復現上述癥狀,成為研究疼痛分子機制和干預手段的經典模型。
二、造模方法
1. 手術操作CCI模型的構建以手術結扎或夾閉坐骨神經為**,具體步驟如下:麻醉與暴露:選用200-250g雄性Wistar或SD大鼠,腹腔注射麻醉后,消毒后肢,沿股骨外側縱向切開皮膚,鈍性分離肌肉暴露坐骨神經。
神經處理:結扎法:在坐骨神經分叉前游離神經干,用4-0縫合線結扎3-4處,間隔1mm,結扎力度以引起肢體輕微抽動為宜,避免完全切斷或過松。
夾閉法:部分研究采用特制損毀夾夾閉神經干4個點,每點夾持75秒,總時長5分鐘,夾力50g,形成局部缺血性損傷。
術后護理:縫合傷口后撒青霉素粉預防感染,術后提供溫暖環境及鎮痛處理,觀察后肢步態異常(如跛行、足趾卷曲)以確認模型成功。
2. 假手術組對照假手術組*暴露坐骨神經而不結扎,以排除手術創傷對結果的干擾。
三、實驗評價
1. 行為學評估機械痛覺過敏(von Frey測試):將大鼠置于金屬網篩,用不同強度纖維絲(0.4-15g)垂直刺激足底,記錄縮足反射閾值。CCI模型大鼠閾值***降低(正常10g vs. CCI 2-4g)。
熱痛覺過敏(熱板法):測量足底接觸熱板(50-55℃)至抬腿的潛伏期,CCI大鼠潛伏期縮短至4-8秒(正常10-15秒)。
自發痛行為:觀察舔舐、抬腿等自發行為,CCI大鼠頻率和持續時間***增加。
情緒行為(明暗箱實驗):評估焦慮樣行為,CCI大鼠在明室停留時間減少,穿梭次數降低。
2. 分子與組織學檢測HE染色:觀察神經纖維脫髓鞘、炎性細胞浸潤等病理變化。Western blot/PCR:檢測疼痛相關分子(如CX3CL1、CSF1、PI3K/Akt/mTOR通路蛋白)的表達變化。
免疫組化:分析脊髓背角小膠質細胞活化標志物(如Iba1)的表達水平。
四、檢測服務與平臺
艾菱菲生物支持提供從模型構建到多組學分析的全流程服務,例如:分子生物學平臺:qRT-PCR、Western blot、外泌體鑒定等。蛋白組學與代謝組學:通過LC-MS、iTRAQ技術篩選疼痛相關生物標志物。
病理學平臺:免疫熒光染色、HE染色評估神經損傷程度。
藥效學評價:如脊髓刺激(SCS)或緩釋藥物在CCI模型中的鎮痛效果驗證。
五、注意事項與倫理規范動物福利:遵循“3R原則”,減少動物痛苦,術后提供充足鎮痛與抗***措施。
數據可靠性:嚴格設置假手術組與空白對照,確保實驗條件標準化。
六、應用與展望
CCI模型已用于評估新型鎮痛藥物(如緩釋局***)、神經調控技術(如脊髓電刺激)及基因***策略。未來結合多組學技術與人工智能分析,有望進一步揭示疼痛的分子網絡,推動個體化***發展。