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河南PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

來源: 發布時間:2024-08-30

Genovis 是一家瑞典生物技術公司,自2010年起,為生物制藥公司提供SmartEnzymes?工具酶。Genovis提供一系列獨特、快速且易于使用的酶學工具,主要用于生物制藥行業和學術界。 我們在全球范圍內提供創新的智能酶SmartEnzymes?,用于單克隆抗體、ADC、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開發、生產和質量控制。您可以在我們的網站上“Application頁面”獲得更多應用信息,如果您有興趣,可以和我們一起做一個“SmartStories”,也可以聯系我們。?ImpaRATOR 來源于銅綠假單胞菌,在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽,分子量為 97 kDa。河南PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

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Genvois的SialEXO產品是唾液酸酶,用于N-和O-糖基化蛋白的有效去唾液酸化。SialEXO凍干由兩種唾液酸酶組成,每種唾液酸酶都具有獨特的活性,并且它們同時起作用。一種酶對α2-3、α2-6和α2-8連接的唾液酸具有很好的活性,另一種酶(SialEXO 2-3)通過α2-3-鍵快速水解唾液酸。SialEXO凍干可在2小時內去除天然蛋白質上的所有唾液酸。SialEXO在天然條件下水解糖蛋白,在pH值范圍為6.5至9時顯示出活性。這些酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達。兩種酶都含有 His 標簽,酶的分子量為 43 kDa 和 66 kDa。 湖北高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究FucosEXO 是α-巖藻糖苷酶混合物。

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蛋白質的N-糖基化特征是一個關鍵的質量屬性。它會影響生物制藥的安全性和有效性,因此需要在開發和生產過程中進行表征和監測。常見的聚糖分析工作流程是用PNGase F釋放N-聚糖,然后用熒光標記物(如2-AB、2-AA、普魯卡因胺或RapiFluor-MS?(沃特世公司))標記生成的聚糖。然后使用HILIC-HPLC或毛細管電泳分離標記的聚糖,以表征和定量不同的聚糖結構。 在這里,使用游離聚糖方法分析zhiliao性抗體曲妥珠單抗、Fc-融合蛋白依那西普和糖蛋白RNase B的N-聚糖。曲妥珠單抗和依那西普在天然條件下在37°C下用Genvois的PNGase F去糖基化1小時,而RNase B需要變性和還原才能完全去糖基化。因此,在50°C下用PNGase F去糖基化10分鐘之前,用RapiGest? SF表面活性劑(沃特世公司)和TCEP處理RNase B。 用RapiFluor-MS標記所得游離的聚糖,并通過HILIC UPLC-FLD-MS進行分析。

我們測量了FucosEXO從一組dai表不同鍵的不同寡糖底物中釋放的巖藻糖。FucosEXO可有效釋放α1-2、α1-3和α1-4連接的巖藻糖,對α1-6連接的巖藻糖殘基沒有活Genovis的FucosEXO的底物特異性:巖藻糖以不同的鍵存在于N-和O-聚糖上。α1-2、α1-3 和 α1-4 連接的巖藻糖常見于 O-聚糖中,并作為 N-聚糖的天線巖藻糖基化,而 α1-6 連接的巖藻糖被發現是 N-聚糖he心的修飾。β1-3,4半乳糖的水解:Genovis的GalactEXO 是一種β-半乳糖苷酶混合物,可水解 N-和 O-糖基化蛋白中的 β1-3,4-連接末端半乳糖。上海倍篤生物涵蓋藥物研發的全流程,抗體結構域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等。

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用于離心柱中糖蛋白去膠基化的固定化酶。Genovis的FucosEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯的FucosEXO酶,用于糖蛋白的去氟糖基化,而不會用酶污染z終制劑。Microspin 色譜柱可用于 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去膠基化。1. 易于使用的離心柱;2. 提高酶與底物的比例,提高消化效率;3. z終樣品中不含酶。有效去除α1-2,3,4連接巖藻糖:分析用復雜聚糖結構修飾的糖蛋白可能具有挑戰性,需要高效和特異性的酶學工具。Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物,用于有效水解 N-和 O-糖蛋白或寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4 連接的巖藻糖殘基,無需輔助因子或添加現O-糖基化藥有Tn抗原,定量he心 GalNAc 水平,減少了異質性。河南PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

GalactEXO由兩種半乳糖苷酶組成,均帶有His標簽,組分的分子量為87 kDa和109 kDa。河南PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

Genovis的SialEXO產品是用于去除和分析唾液酸的唾液酸酶。這些酶對天然糖蛋白或游離的聚糖結構上存在的 N- 和 O-連接聚糖均具有活性。SialEXO用于在用OpeRATOR或OglyZOR消化之前預處理O-糖基化蛋白。其他應用包括降低樣品復雜性、電荷異構體分析和外切糖苷酶陣列。N-連接、O-連接和游離聚糖的高效去唾液酸化快速去除唾液酸,增強對蛋白質電荷變體的分析可固定在即用型離心柱中。然后可以用FabRICATOR消化所得的去糖基化蛋白,并通過中級質譜分析。我們將該工作流程應用于依那西普的分析,雖然未經處理的TNFR結構域過于復雜而無法分析,但O-聚糖組成可以在用PNGase F處理后進行分離和比較。河南PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

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