外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——聚合物沉淀法。用于分離病毒和其他的生物大分子，已有50多年歷史,近幾年,將其作為一種新的方法來分離外泌體。目前,市場已經(jīng)有應(yīng)用聚乙二醇(polyeth yleneglycol,PEG)溶液提取外泌體的試劑盒,常見的是SystemBiosciences公司的ExoQuick?和ExoQuick-TC?kits,該試劑盒操作簡單不需要特殊的儀器,但是價(jià)格昂貴。提取外泌體的試劑盒主要成分是PEG8000(30%~50%),將試劑盒與體液或細(xì)胞培養(yǎng)液4℃孵育過夜,之后再低速離心。即可進(jìn)行外泌體的提取，此方法實(shí)行起來較為簡單。外泌體載yao方法-共孵育方法適用于親脂類藥物。福建組織外泌體載藥參考價(jià)

?外泌體載藥在腦血管疾病zhiliao中的應(yīng)用：1缺血性腦卒中(IS)是一種常見的腦血管疾病研究顯示外泌體負(fù)載CircＲNASCMH1傳遞增強(qiáng)了IS模型的神經(jīng)可塑性，抑制了膠質(zhì)細(xì)胞的反應(yīng)性和外周免疫細(xì)胞的浸潤，促進(jìn)了IS后的功能恢復(fù)。2腦出血(ICH)是卒中句破壞性的亞型。研究發(fā)現(xiàn)裝載miＲ-21的MSCs外泌體可以為ICH的zhiliao提供一種新的方法，減輕ICH后繼發(fā)性損傷引起的神經(jīng)元死亡和腦血腫。3腦動(dòng)脈粥樣ying化是腦血管疾病的主要原因。參與動(dòng)脈粥樣ying化的大多數(shù)細(xì)胞可以產(chǎn)生外泌體。因此，外泌體介導(dǎo)的miＲNA或反義miＲNA傳遞可被視為zhiliao腦動(dòng)脈粥樣ying化的工句。4研究發(fā)現(xiàn)在顱內(nèi)動(dòng)脈瘤（IA）的小鼠模型中靜脈應(yīng)用MSC外泌體可將IA破裂率降低39%。上海樣本外泌體載藥大概費(fèi)用利用成纖維細(xì)胞樣干細(xì)胞來源的外泌體裝載靶向KRAS的siRNA，可以抑制胰腺ai的生長。

外泌體載yao方法已在多種研究中得到應(yīng)用，但各自有一定的局限性：共孵育依賴藥物跨膜運(yùn)輸而包載；超聲法和電穿孔法較為常用，但都破壞了外泌體的膜結(jié)構(gòu)而使藥物進(jìn)入外泌體，與參數(shù)有較大關(guān)系；擠壓法依賴儀器的機(jī)械力，但機(jī)械力是否對(duì)外泌體產(chǎn)生影響未知；反復(fù)凍融法載藥能力較差；對(duì)外泌體修飾可以達(dá)到提高細(xì)胞攝取或者靶向而改善藥物的療效；藥物混合物中加入皂苷會(huì)有體內(nèi)溶血的潛在風(fēng)險(xiǎn)。目前研究者應(yīng)用較多的方法是共孵育結(jié)合超聲、超聲、電穿孔、修飾外泌體。

外泌體由于在細(xì)胞通訊的過程中可以攜帶基因，引起了基因zhiliao研究者的廣fan關(guān)注。外泌體作為基因載體與傳統(tǒng)的病毒或非病毒載體相比，其優(yōu)勢在于:(1)從患者體內(nèi)獲取的外泌體，經(jīng)載入基因后，再注入患者體內(nèi)幾乎不會(huì)引起免疫反應(yīng)，更加安全;(2)外泌體體積很小，可以逃過網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的捕捉，有效保護(hù)承載的基因;(3)承載基因的外泌體可以通過與目標(biāo)細(xì)胞膜融合的方式，將基因類藥物釋放到細(xì)胞質(zhì)中。而其他非病毒載體一般被受體細(xì)胞內(nèi)吞后才能將基因類藥物輸送至細(xì)胞中的內(nèi)涵體。內(nèi)涵體內(nèi)pH值約為5～7.2，易將基因類藥物酸化、破壞，并且也有部分藥物無法從內(nèi)含體中逃脫出，因而，相比之下，可以進(jìn)行膜融合的外泌體運(yùn)載的基因類藥物的轉(zhuǎn)染效率更高。樹突細(xì)胞分泌的外泌體表面會(huì)表達(dá)出CD9，有利于加強(qiáng)外泌體與靶細(xì)胞的融合，提高外泌體對(duì)藥物運(yùn)輸?shù)男省?/p>

間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體（MSC-Exo）在外泌體載藥中作為藥物遞送的載體具有獨(dú)特優(yōu)勢。目前臨床上普遍使用MSCs的原代細(xì)胞，雖然其可以產(chǎn)生大量的外泌體，但是對(duì)于大規(guī)模生產(chǎn)來說，它的增殖能力有限，產(chǎn)生的外泌體可能具有批次間的差異。Chen等人發(fā)現(xiàn)，使用c-myc轉(zhuǎn)染人胚胎干細(xì)胞衍生的間充質(zhì)干細(xì)胞(hESC-MSC)，能夠在不影響外泌體生產(chǎn)質(zhì)量的前提下，提高M(jìn)SCs的增殖率，縮短生產(chǎn)時(shí)間。轉(zhuǎn)染的hESC-MSC能夠供應(yīng)毫克范圍內(nèi)的外泌體，為生產(chǎn)具有生物學(xué)效益的外泌體提供了一定的可行性。此外，還可以對(duì)外泌體進(jìn)行功能化修飾，進(jìn)一步增強(qiáng)外泌體的作用優(yōu)勢。外泌體的功能化修飾能夠延長外泌體的循環(huán)時(shí)間、增強(qiáng)外泌體在細(xì)胞質(zhì)的遞送效率和促使外泌體具有更強(qiáng)的靶向性。負(fù)載姜黃素的外泌體可經(jīng)外泌體轉(zhuǎn)運(yùn)通過血腦屏障, 運(yùn)送到腦組織中, 減輕氧化應(yīng)激，維持腦血管屏障功能。安徽動(dòng)物組織樣本外泌體載藥實(shí)驗(yàn)服務(wù)

藥物載入到外泌體中的方式可分為兩種，即外源性載yao方式和內(nèi)源性載yao方式。福建組織外泌體載藥參考價(jià)

外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——梯度密度離心法。外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,因此,可以采用密度梯度離心法來分離外泌體。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合,原理是先除去非囊泡物質(zhì),再通過梯度密度濃縮提取外泌體,該方法可以得到相對(duì)較為純凈的外泌體。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h,但是2012年,研究者使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,因此,該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時(shí)間不充足,污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,特別是這個(gè)密度范圍又比較寬。福建組織外泌體載藥參考價(jià)