外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——超高速離心法。其中超高速離心法是常用的,該方法是被譽(yù)為分離外泌體的“金標(biāo)準(zhǔn)”。因操作簡單,不需要復(fù)雜的技術(shù)支持,并且成本相對較低而被廣fan使用。但是該方法耗時、產(chǎn)率低,得到的外泌體的數(shù)量和質(zhì)量很大程度上受轉(zhuǎn)子的類型、轉(zhuǎn)子沉降角度等因素影響,其中主要的問題就是差速離心法獲得的沉淀物是外泌體,但也會有其他的囊泡、蛋白質(zhì)或蛋白和RNA的聚集體。所以得到的外泌體的純度和產(chǎn)量都不高。裝載連翹苷(phil)的MHS來源外泌體對A549細(xì)胞遷移能力有較為明顯的抑制作用。福建組織外泌體載藥實(shí)驗(yàn)價格比較
天然來源的外泌體含有眾多內(nèi)源性脂質(zhì)、蛋白及核酸類物質(zhì),其自身具有一定的成藥潛力,例如間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體在組織修復(fù)領(lǐng)域獲得了巨大成功。當(dāng)外泌體用作遞送載體時,一般還需人為裝載藥物。理想的載yao方法不僅要實(shí)現(xiàn)較高的載藥效率,還應(yīng)保留外泌體和藥物的功能和完整性。目前,在不破壞外泌體膜完整性的情況下將藥物有效載入到外泌體中仍是一個巨大挑戰(zhàn)?,F(xiàn)有的載yao方法可分為分泌前載藥法和分泌后載藥法。分泌前載藥法通常將親代細(xì)胞與藥物共孵育(一般需要加轉(zhuǎn)染試劑),使藥物進(jìn)入細(xì)胞質(zhì),細(xì)胞質(zhì)中的藥物通過主動或被動的方式被分選到外泌體中,然后通過合適的提取方法即可獲得載藥的外泌體。分泌后載yao方法是目前常用的外泌體載藥策略,通常需要先分離提純外泌體,再將藥物載入其中。江蘇動物血液樣本外泌體載藥實(shí)驗(yàn)大概費(fèi)用MHS來源外泌體裝載連翹苷(phil)對外泌體的特異蛋白(CD63,Alix)的表達(dá)無影響。
外泌體載藥系統(tǒng)的性質(zhì)評估:1對外泌體進(jìn)行一般性質(zhì)評估的方法已有多種,包括納米顆粒跟蹤分析技術(shù)(NTA)、動態(tài)光散射(DLS)、流式細(xì)胞術(shù)、原子力顯微技術(shù)(AFM)、透射電子顯微鏡(TEM)、掃描電子顯微鏡(SEM)等。2細(xì)胞實(shí)驗(yàn):將載藥外泌體添加到相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基,通過培養(yǎng)觀察、檢測表達(dá)物或統(tǒng)計(jì)細(xì)胞凋亡率來驗(yàn)證載藥外泌體與靶細(xì)胞的親和力、藥理作用并分析其作用機(jī)制。3動物實(shí)驗(yàn):不jin可驗(yàn)證載藥外泌體的體內(nèi)藥理作用,還可研究其全部或部分藥動學(xué)參數(shù)。與細(xì)胞實(shí)驗(yàn)比較,動物實(shí)驗(yàn)考慮內(nèi)環(huán)境、體溫、免疫qing除等各種因素對載藥外泌體的影響,同時還考慮個體差異的影響,從而得出更句臨床意義的結(jié)論。
休眠性乳腺ai細(xì)胞會促使間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)釋放含有不同miRNA(如miR-222/223)的外泌體,從而促進(jìn)一部分ai細(xì)胞處于靜止期,并賦予抗藥性。有研究發(fā)現(xiàn),間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體(MSC-Exo)能夠通過遞送miRNA-142-3p抑制劑在體外和體內(nèi)降低乳腺ai的致瘤性。在體外,MSC-Exo可有效遞送miR-142-3p抑制劑,降低miR-142-3p和miR-150水平,增加調(diào)控靶基因APC和P2X7R的轉(zhuǎn)錄。在體內(nèi),MSC-Exo能夠?qū)⒁种菩怨押塑账徇f送到中流組織中以下調(diào)miR-142-3p和miR-150的表達(dá)水平。此外,MSC-Exo遞送的miR-100能夠通過調(diào)節(jié)乳腺ai細(xì)胞中mTOR/HIF-1α/VEGF信號軸,抑制體外血管生成,從而影響乳腺ai細(xì)胞的行為。相同劑量的PTX,PTX-M1-Exos載藥體系和游離的PTX相比,對小鼠乳腺ai4T1的抑制率更高。
大分子蛋白類藥物可以通過以下方法進(jìn)行外泌體載藥。Haney等人采用常溫下共孵育、加入皂素后孵育、反復(fù)凍融、超聲、擠出等多種不同的方法將過氧化氫酶包載到外泌體中。結(jié)果顯示,外泌體通過超聲和擠出兩種方式句有較高的載藥量,分別為26.1%和22.2%,通過被動擴(kuò)散方式的載藥量jin為4.9%,但當(dāng)加入句有透皮促進(jìn)作用的皂素后,外泌體的載藥量會明顯提高至18.5%。值得注意的是,外泌體的載藥量不jin與載yao方式有關(guān),也取決于藥物的性質(zhì)、外泌體脂質(zhì)的組成,而且不同的載yao方式也會影響細(xì)胞對外泌體的攝取。裝載miR-17-92團(tuán)簇的間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體處理中風(fēng)大鼠,其神經(jīng)學(xué)功能得到改善。江西樣本外泌體載藥
母乳外泌體改造后的載藥體,不僅擁有外泌體本身的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn),還兼具改造后功能。福建組織外泌體載藥實(shí)驗(yàn)價格比較
外泌體載藥系統(tǒng)一直是眾多研究者關(guān)注的焦點(diǎn)。外泌體作為細(xì)胞-細(xì)胞間交流的“運(yùn)載工句”,外泌體在正常及疾病下都發(fā)揮著不可忽視的功能。利用抗ai癥藥物進(jìn)行中流zhiliao是抑制中流的一個重要方法,目前抗ai癥藥物的運(yùn)載存在著種種挑戰(zhàn),主要體現(xiàn)在:(1)抗ai癥藥物的疏水性;(2)抗ai癥藥物的毒性以及非靶向性;(3)易被人體qing除,體內(nèi)循環(huán)的半衰期很短等。采用外泌體運(yùn)輸抗ai癥藥物,可以提高藥物體系的水溶性,降低藥物對人體的毒性以及避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)捕捉從而延長其循環(huán)時間。福建組織外泌體載藥實(shí)驗(yàn)價格比較