外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——聚合物沉淀法。用于分離病毒和其他的生物大分子，已有50多年歷史,近幾年,將其作為一種新的方法來分離外泌體。目前,市場已經(jīng)有應(yīng)用聚乙二醇(polyeth yleneglycol,PEG)溶液提取外泌體的試劑盒,常見的是SystemBiosciences公司的ExoQuick?和ExoQuick-TC?kits,該試劑盒操作簡單不需要特殊的儀器,但是價格昂貴。提取外泌體的試劑盒主要成分是PEG8000(30%~50%),將試劑盒與體液或細(xì)胞培養(yǎng)液4℃孵育過夜,之后再低速離心。即可進行外泌體的提取，此方法實行起來較為簡單。電穿孔是常見的外泌體載藥手段,其原理是通過瞬時電流在外泌體膜上產(chǎn)生孔洞以允許藥物滲入其中。細(xì)胞外泌體載藥咨詢問價
與人工合成囊泡相比，外泌體雖然具有一定的靶向性，但由于其高度的復(fù)雜性和成分的多樣性，作為載藥體的應(yīng)用仍缺乏普遍靶向性，可能產(chǎn)生脫靶效應(yīng)，誘發(fā)不良反應(yīng);而且可溶性低，循環(huán)半衰期短，因此針對外泌體表面標(biāo)志物的改造以獲得靶向性一直是研究熱點;此外，也有大量研究針對內(nèi)容物進行改造，近年來主要以外源性的抗中流藥物、核酸分子、轉(zhuǎn)錄因子和酶類，內(nèi)源性母乳多糖、低聚糖、多肽等為“貨物”，將它們載入外泌體后運送到標(biāo)靶位置。對母乳外泌體進行載藥改造，既保留了外泌體本身的特性，同時充分利用了功能性內(nèi)外源物質(zhì)，又可進一步優(yōu)化外泌體的靶向性與穩(wěn)定性，有望為zhiliao新生兒相關(guān)疾病提供新的思路和方法。細(xì)胞外泌體載藥咨詢問價外泌體內(nèi)源性載yao方式即先將藥物載入供體細(xì)胞中，當(dāng)藥物分選進入外泌體并釋放外泌體后分離純化而獲。
外泌體由于在細(xì)胞通訊的過程中可以攜帶基因，引起了基因zhiliao研究者的廣fan關(guān)注。外泌體作為基因載體與傳統(tǒng)的病毒或非病毒載體相比，其優(yōu)勢在于:(1)從患者體內(nèi)獲取的外泌體，經(jīng)載入基因后，再注入患者體內(nèi)幾乎不會引起免疫反應(yīng)，更加安全;(2)外泌體體積很小，可以逃過網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的捕捉，有效保護承載的基因;(3)承載基因的外泌體可以通過與目標(biāo)細(xì)胞膜融合的方式，將基因類藥物釋放到細(xì)胞質(zhì)中。而其他非病毒載體一般被受體細(xì)胞內(nèi)吞后才能將基因類藥物輸送至細(xì)胞中的內(nèi)涵體。內(nèi)涵體內(nèi)pH值約為5～7.2，易將基因類藥物酸化、破壞，并且也有部分藥物無法從內(nèi)含體中逃脫出，因而，相比之下，可以進行膜融合的外泌體運載的基因類藥物的轉(zhuǎn)染效率更高。
中流轉(zhuǎn)移是臨床致死的重要原因,目前尚無特別有效的zhiliao手段。大蒜中的有效活性成分二烯丙基三硫化物(DATS)具有良好的抗中流轉(zhuǎn)移作用,如何將其遞送到轉(zhuǎn)移灶發(fā)揮抗中流轉(zhuǎn)移作用是亟待解決的關(guān)鍵問題。隨著對生物來源載體的深入研究,中流細(xì)胞衍生的外泌體因其具有轉(zhuǎn)移qi官親和力和荷載小分子藥物的性能從而引起關(guān)注。利用外泌體的載體性能和組織親和性,提取肺轉(zhuǎn)移中流細(xì)胞的外泌體用來包載DATS,以此制備轉(zhuǎn)移灶靶向的載藥系統(tǒng),從而可以提高DATS的抗中流轉(zhuǎn)移作用。外泌體載阿霉素在小鼠體內(nèi)的耐受量高于游離的阿霉素,增加了阿霉素對乳腺ai和卵巢ai的zhiliao指數(shù)。
普通的外泌體在體內(nèi)易被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)快速qing除，難以保證載藥系統(tǒng)在到達(dá)靶部位發(fā)揮其作用前的完整性。已有相關(guān)研究證實，使用聚乙二醇衍生物對外泌體膜進行修飾，可以屏蔽網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的識別和攝取，延長其循環(huán)時間。Kooijmans等人將EGa1納米抗體連接到修飾聚乙二醇的膠束表面，利用合成膠束在不同溫度（4℃、40℃、80℃）下與外泌體孵育，使其插入到外泌體表面。研究結(jié)果表明，當(dāng)孵育溫度為40℃時能較好保持外泌體膜的完整性，而且對EG-FR受體過度表達(dá)的A431細(xì)胞有較高的結(jié)合率。將同時修飾EGa1抗體和聚乙二醇的外泌體靜脈注入荷瘤小鼠體內(nèi)，結(jié)果顯示，在注射60min后，血漿中仍可檢測到外泌體的存在。外泌體具有透過血腦屏障的能力，包載藥物的外泌體可通過鼻腔給藥的方式到達(dá)腦實質(zhì)zhiliao腦部疾病。細(xì)胞外泌體載藥咨詢問價
利用成纖維細(xì)胞樣干細(xì)胞來源的外泌體裝載靶向KRAS的siRNA，可以抑制胰腺ai的生長。細(xì)胞外泌體載藥咨詢問價
外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——免疫親和層析法。利用生物體內(nèi)存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進行分離的方法,主要用于生物大分子的分離、純化。將其應(yīng)用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體,如TSG101或四跨膜蛋白。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合,只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識別,這使得提取的外泌體純度高,但是產(chǎn)量低。分別用超速離心、密度梯度離心和免疫層析法,從血漿和細(xì)胞上清中提取外泌體蛋白,結(jié)果表明,免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標(biāo)記蛋白(Alix、CD9、CD63),同時,ELISA和PCR結(jié)果也證明了該方法的可行性。細(xì)胞外泌體載藥咨詢問價